iLite®技术介绍

iLite ®技术

适用于整个药物开发过程的多功能工具

iLite技术基于报告基因检测格式，为整个药物开发过程以及生物药物监测的应用提供了无缝解决方案。  

该技术几乎可以针对任何药物靶标进行开发，并提供一种简单、快速和准确的测试格式，用于测量和量化药物活性和免疫原性。细胞以 Assay Ready 格式提供，无需细胞培养，并允许在部门之间或第三方合作者之间无缝转移检测。

通过将归一化读数和嵌合转录因子等功能与高度灵活的产品格式相结合，iLite技术可帮助您充分利用生物测定。

工作原理 – iLite ®基于细胞的技术原理

iLite基于细胞的检测基于简单的报告基因技术。对特定靶标或配体具有特异性的受体在细胞表面表达。一旦配体与受体结合，就会触发细胞内信号级联，从而导致启动子区域与报告基因融合，在本例中为萤火虫荧光素酶。 

报告基因的激活以及底物的添加将产生光。光量与与受体结合的配体的量和活性相关。

 

双报告基因系统

当配体与其受体结合时，特定的细胞内信号传导途径被激活，触发编码荧光素酶的特定报告基因构建体的转录。当添加底物时，荧光素酶产生光，然后可以使用光度计将荧光素酶的量以及由此配体的量和活性测量为光发射。

iLite细胞是它们还包含第二个报告基因，该基因受组成型启动子控制，这意味着它在任何活细胞中连续表达。换句话说，第二个报告基因产生的光量将与活细胞的数量相关，因此可用于标准化结果以补偿细胞数量的差异。

ILITE ADCC 技术 – 它是如何工作的？抗体依赖性细胞介导的细胞毒性 (ADCC) 是一种免疫反应，其中携带 Fc 受体的效应细胞识别并杀死表面表达肿瘤或病原体特异性抗原的抗体包被的靶细胞。许多基于抗体的疗法至少部分依赖于它们在患者中诱导 ADCC 的能力。 iLite  ADCC 产品线提供了一种方便而强大的方法来测量抗体在体外 引发 ADCC 的功效 。  

基于 Fc 受体、抗体和靶标交联的发光

当效应细胞与与其靶细胞结合的药物抗体相互作用时，ADCC 过程就会被触发。效应细胞表面上的FcγIIIa (CD16a)受体与抗体的Fc区结合，从而在效应细胞和靶细胞之间建立桥梁。

在形成该桥之后，工程化的效应细胞将通过细胞  内途径产生荧光素酶，并专门从这种交联和信号传导中产生发光，而不是像在体内情况下那样裂解靶细胞。发光的强度与药物诱导 ADCC 的能力相关。

与抗体结合后，效应细胞中的 NFAT、CREB、NfκB、API 和 Jak-STAT 通路被激活。控制萤火虫荧光素酶基因的启动子经过巧妙设计，包含所有这些途径的结合位点。与仅依赖 NFAT 响应启动子的市售报告基因相比， 这更接近地反映了体内FcγRIIIA 信号转导途径。  

标准化基因可轻松进行样本之间的比较

与大多数iLite细胞系一样，iLite ADCC 效应细胞也具有次级荧光素酶读数，来自在组成型启动子控制下表达的荧光素酶基因。这使得能够根据细胞数量对每个单独的读数进行标准化，并补偿潜在的基质效应。    

工程化靶细胞可筛选非特异性激活  

iLite ADCC 系统配备了一套工程同系物 (+) 和 (- )靶细胞，可以精确、特异性地确定 ADCC 活性的差异。它还可以比较针对相同抗原的不同治疗抗体之间的 ADCC 活性。 

目标 (+) 细胞

靶（+）细胞 已被设计为通过内源表达的过度激活或通过插入编码该抗原的基因来过度表达特定抗原。

这使得抗原在细胞表面上得到稳定且受控的表达。

目标 (-) 细胞

目标 (-) 细胞 基于与目标 (+) 细胞相同的细胞背景，但不呈现特定的表面目标分子。因此，效应器和靶细胞之间无法通过抗体建立交联，并且不会产生萤火虫荧光素酶的发光。

因此，特异性抗原阴性靶细胞提供了一种检测和校正有时在人血清样品中观察到的非特异性效应的方法。