DNA 标记方案——点击寡核苷酸和 DNA 的化学标记
点击化学是一种多功能反应，可用于合成各种缀合物。事实上，任何生物分子都可以使用点击化学方法轻松地用小分子标记，例如荧光染料、生物素等。
点击化学反应发生在两种组分之间： 叠氮化物和炔烃（末端乙炔）。叠氮基和炔基在天然生物分子中几乎从未遇到过。因此，该反应具有高度生物正交性和特异性。如果需要标记寡 核苷酸，可以在许多定制寡核苷酸合成设施和公司订购炔烃修饰的寡核苷酸。
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使用下表计算点击化学标记所需的试剂体积。准备所需的储备溶液（见附录）。
试剂 混合物中的最终浓度 原液浓度 炔烃修饰寡核苷酸 变化（20 — 200 uM） 各不相同 叠氮化物 1.5 x（寡核苷酸浓度） 10 mM DMSO 溶液 二甲基亚砜 50体积％ — 抗坏血酸 0.5毫米 5 mM 水中 铜-TBTA络合物 0.5毫米 10 mM，溶于 55 vol% DMSO -
将炔烃修饰的寡核苷酸或 DNA溶解在耐压小瓶中的水中。
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添加2M 醋酸三乙铵缓冲液（pH 7.0）至终浓度 0.2 M。
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添加DMSO，并涡旋。
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添加叠氮化物储备溶液（DMSO 中的 10 mM），并涡旋。
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将所需体积的 5mM 抗坏血酸储备溶液添加到混合物中，并短暂涡旋。
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通过向其中鼓泡惰性气体 30 秒来对溶液进行脱气。可以使用氮气、氩气或氦气。
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将所需量的 10 mM 铜 (II)-TBTA 库存在 55% DMSO 中添加到混合物中。用惰性气体冲洗小瓶并盖上盖子。
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涡旋混合物。如果观察到明显的叠氮化物沉淀，则将小瓶在 80°C 下加热 3 分钟，然后涡旋。
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在室温下保存过夜。
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用丙酮（对于寡核苷酸）或乙醇（对于 DNA）沉淀结合物。
沉淀寡核苷酸缀合物：
向混合物中添加至少 4 倍过量体积的 3% 高氯酸锂丙酮溶液（如果混合物体积很大，则分成几个小瓶）。
沉淀 DNA 缀合物：
向混合物中添加乙酸钠至终浓度0.3M；
添加 2.5 体积的乙醇（或 0.8 体积的异丙醇）。
充分混合并在-20°C下保持20分钟。
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10000 rpm 离心 10 分钟。
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丢弃上清液。
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用丙酮 (1 mL) 洗涤沉淀，以 10000 rpm 离心 10 分钟。
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弃去上清液，干燥沉淀，并通过 RP-HPLC 或 PAGE 纯化缀合物。