免疫组织化学故障排除
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来源 |
解决方案 |
| 脱蜡不充分 | 延长切片脱蜡时间或更换新鲜二甲苯 |
| 无活性的一抗 | 更换新一批抗体 |
| 由于储存不当，抗体无法发挥作用 | 将抗体分装成较小的体积并储存在冰箱中（-20 至 -70°C），并避免重复冻融循环。或根据制造商的说明储存抗体。 |
| 抗体浓度太低 | 增加一抗和/或二抗的浓度。或者运行连续稀释测试以确定提供最佳信噪比的最佳稀释度 |
| 抗体 孵育时间不足 | 增加抗体 孵育时间 |
| 组织固定不充分或不正确 | 增加后固定时间或尝试不同的固定剂 |
| 组织过度固定 | 减少后固定的持续时间。如果组织已经过度固定，请执行适当或推荐的抗原修复程序。 |
| 二抗和一抗不相容 | 使用可与一抗相互作用的二抗。例如，如果一抗是从兔子中产生的，则使用抗兔二抗 |
| 无活性二抗 | 更换新一批抗体 |
| 无活性 ABC 试剂 | 更换新一批试剂 |
| 酶底物 系统有缺陷或不相容 | 更换新一批试剂 |
| 底物孵育时间不足 | 增加底物孵育时间 |
| 封固剂不正确 | 选择正确的封固剂 |
| 试剂使用顺序错误或步骤省略 | 检查注释或使用的程序 |
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来源 |
解决方案 |
| 一抗和/或二抗浓度过高 | 降低抗体浓度或进行滴定以确定一抗和二抗的最佳稀释度 |
| 孵化时间太长 | 减少孵化时间 |
| 孵化温度太高 | 降低孵化温度 |
| 底物 孵育时间太长 | 减少底物孵育时间 |
| 切片变干 | 避免切片变干 |
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来源 |
解决方案 |
| 切片清洗不充分 | 步骤之间至少清洗 3 次 |
| 组织含有内源性酶，例如过氧化物酶或碱性磷酸酶 | 在孵育一抗之前，使用甲醇或左旋咪唑溶液（阻断 AP）中的 3% 过氧化氢（阻断过氧化物酶）阻断内源酶活性。 |
| 组织含有内源性生物素活性 | 在孵育一抗之前，使用亲和素/生物素封闭试剂封闭内源生物素活性。 |
| 一抗与组织非特异性结合或抗体浓度过高 | 使用较高稀释度的一抗可以减少非特异性结合 |
| 二抗与组织的非特异性结合 | 用来自同一物种的正常血清作为二抗处理组织。 |
| 二抗与类似物种的组织发生交叉反应，即兔抗大鼠 IgG 可能与小鼠组织发生交叉反应。 | 使用预吸附的第二抗体，即在小鼠组织上使用兔抗大鼠IgG，小鼠吸附，或在大鼠组织上使用兔抗小鼠IgG，大鼠吸附。 |
| 由于固定不充分导致组织抗原扩散 | 增加后固定时间 |
| 用于小鼠组织的小鼠抗体 | 一抗孵育前用 MouseOnMouse 封闭试剂处理组织 |
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切片变干 |
避免切片变干 |