Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

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样本实验方案

概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.用测试化合物和Nitrite NOT工作溶液孵育细胞
3.添加分析缓冲液II
4.监测Ex / Em = 650/680 nm的荧光强度

溶液配制

1.工作溶液

将20 µL Nitrixyte NIR储备溶液（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液I（组分B）中，并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少2小时。 注意：20 µL Nitrixyte NIR储备溶液足以装满一块板,远离光线。

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样品操作及实验分析

1.要刺激内源性NO，请在细胞培养基或所需的缓冲液（例如PBS或HHBS）中，用10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）处理细胞。对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的培养基或化合物缓冲液。注意：添加化合物之前不必洗涤细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在添加化合物之前将生长培养基和血清因子吸掉。加入90 µL /孔（96孔板）和20 µL /孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

2.在细胞板中加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Nitrixyte NIR工作溶液。将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下共同孵育一段时间，并避光。注意：请勿去除测试化合物。注意：对于NONOate阳性对照治疗：将细胞与Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下孵育30分钟。除去工作溶液，并将细胞与1mM DEA / NONOate在37℃下进一步孵育30分钟以产生一氧化氮。有关详细信息，请参见图1。我们在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与0.5X Nitrixyte NIR，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。有关详细信息，请参见图2。

3.除去每个孔中的溶液。加入测定缓冲液II（组分C），对于96孔板是100 µL /孔，对于384孔板是25 µL /孔。注意：在添加测定缓冲液II之前，请勿洗涤细胞。

4.使用酶标仪在Ex / Em = 650/680 nm（截止= 665 nm）下以底部读取模式监控荧光的增加，或使用带有Cy5®滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

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