在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题，是无法高效转导非分裂期细胞，而腺病毒载体虽然能转导非分裂期细胞，但在体内不能实现目的基因稳定的长期表达，且反复应用容易引起免疫反应。慢病毒载体不但可以感染非分裂期细胞，还具有容纳外源性目的基因片段大、稳定整合持久表达、免疫反应小等优点。市场上的慢病毒是由人类免疫缺陷病毒（HIV），通过去除env、vif、vpr、vpu等毒性基因改造而来。复制缺陷型HIV载体通常用水泡口炎病毒G糖蛋白来代替HIV-1的包膜进行包装，从而更安全，宿主范围更广，还能增加病毒的滴度。

慢病毒载体的发展经历了3个阶段：第一代慢病毒载体系统是以三质粒系统为代表。在构建时把HIV-1基因组中进行包装、逆转绿和整合所需的顺式作用元件与编码反式作用蛋白的序列分离，分别构建在三个独立的质粒表达系统上，即包装质粒（一个强启动子如CMV作用下，控制除env以外所有病毒结构基因的表达）、包膜质粒（包含VSV-G基因）和载体质粒（包含目的基因），用这三种质粒共同转染包装细胞如人胚肾293T细胞，在细胞上清中即可收获只有一次感染能力、而无复制能力的慢病毒颗粒。第二代慢病毒载体系统从安全性角度又删去了HIV的所有附属基因。第三代慢病毒载体又进一步做了些安全方面的改进，如删除了U3区的3′LTR和tat基因。

安全性始终是大家关心的问题，毕竟是HIV改造过来的，不容许有一点闪失。国内的实验室很多都达不到P2的级别，甚至是一堆人挤在一个房间里做各种各样的实验。Cell BioLabs的新一代慢病毒表达系统对广泛应用的第三代慢病毒进行了改进，将Rev与gag和pol基因分离，这意味着要产生原始的病毒，还需要更多的重组步骤。这样完整的ViraSafe™ 慢病毒表达系统包含5个载体（包括一个对照载体），安全性更高。

慢病毒的表达流程一般如下：将目的基因片段克隆到表达载体上；将重组表达载体，与包装混合物（通常是几个质粒的混合物）共转染293细胞；收集病毒上清，测定滴度；感染目的细胞，瞬时表达目的蛋白或用抗生素筛选稳定细胞株；分析目的蛋白。看上去并不复杂，但中间许多步骤需要不断优化。而且慢病毒有一个软肋，就是病毒滴度不高。你可能还需要纯化或浓缩，才能得到10⁸TU/ml的慢病毒。

与目前市场上流行的新一代慢病毒相比，ViraSafe™ 慢病毒表达系统进行了进一步的优化。如在载体质粒上插入了cPPT（增加基因表达水平）及WPRE（增加感染滴度），在一个包装载体中插入腺病毒VA基因以增加感染滴度；同时在整个系统载体的多个部分做了一些基因的优化或删减和插入以增加病毒的安全性。经过这样的优化，ViraSafe™ 最新一代慢病毒表达系统的包装容量增大到10kb，在应用上更广泛；其感染细胞的滴度及外源基因的表达水平均提高，这也在一定程度上弥补了慢病毒在基因治疗领域内的不足；由于对整个慢病毒系统的多层面改造，降低了载体间的同源率和重组机率，更安全。如果您的实验需要长期稳定的基因表达或沉默，而目的细胞又很难转染，那ViraSafe™ 慢病毒表达系统将是您的最理想选择。

另外，根据您实验的不同需求，ViraSafe™ 设计出不同的启动子类型供您选择。有不含有启动子的通用型慢病毒表达载体，您可以用来表达特异性启动子引导的基因；还有真核基因强力启动子CMV启动子类型以及用于表达shRNA的RNAi以及miRNA的启动子供您选择。

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供全套的慢病毒技术解决方案，ViraSafe™ 慢病毒表达系统有多种样式供您选择；专门针对慢病毒滴度低的软肋而专门设计的ViraBind™慢病毒浓缩&纯化试剂盒，能让你获得更高滴度和纯度的慢病毒；还有多种慢病毒快速定量以及感染滴度滴定检测方案；Cell BioLabs还有转为慢病毒载体用的293LTV细胞及高效转染试剂供您选择，如果您对慢病毒产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询慢病毒相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。