生物活性多肽在内源性物质中占有非常重要的地位,除酶、受体、金属蛋白等生物大分子外,许多合成或分离的多肽对生理过程或病理过程,对疾病的发生、发展或治疗过程有重要意义。多肽中的氨基酸残基彼此以酰胺键(也称肽键)相连接。一般来说,含有的氨基酸少于10个的肽段就称作寡肽,超过的就称为多肽。多肽与蛋白质只有肽链长短之别,二者间并没有严格的区分。
伴随着分子生物学、生物化学技术的飞速发展,多肽研究取得了惊人的的飞跃。人们发现存在于生物体的多肽有数万种,并且发现所有的细胞均能合成多肽。同时,几乎所有的细胞也都受多肽调节,它涉及激素、神经、细胞生长与生殖等各个领域。事实上,肽类药物开发与应用已走出科学家们的实验室,变成了现实,并发挥着其独特的功效。例如,神经紧张肽(NT)能降低血压,对肠和子宫具有收缩作用;促甲状腺素释放激素(TRH)是一种能促进产妇乳汁分泌的多肽;能治疗糖尿病、胃溃疡、胰腺炎的多肽是一种环状的14肽;临床上常用的催产素是一种多肽;近日来在中国及日本已开始使用的糖肽辅助治疗肿瘤,其作用机理是使淋巴系统活化等等。应用多肽技术开发的医用蛋白质芯片(肽芯片)只有指甲盖大小,放置了与肾炎、胃溃疡和胃癌等相关的抗原分子,只要通过芯片阅读仪便可检测到有关疾病的功能状态与变异情况。肽芯片的广泛应用,已在医学临床检测业引发一场技术革命。
自从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成(SPPS)方法以来,经过不断的改进和完善,到今天这个方法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术,许多普通的单位都可以通过现成的多肽合成方案进行合成。对于新手来说,了解一定的多肽合成的原理,对于认识多肽合成的过程,排除合成中碰到的问题都是有好处的。简单来说,最基本的程序化的多肽合成工艺无非就是树脂溶胀、脱保护、偶联、再脱保护、再偶联……其他特殊的合成都是在这个基础上建立的。对于多肽合成的新手来说,有几个误区需要注意:
多肽合成误区一:合成时间越长越好。多肽合成的效率经过多年的摸索和优化,每一步的合成效率在短时间内都能达到99%以上,过长的反应时间对正面的反应产率提高非常有限,却大大增加了副反应发生的机率,所以过长的反应时间并不好。
多肽合成误区二:万能的切肽试剂。大部分的多肽都可以用一套切肽试剂的组合从树脂上切下来,而对于有特殊侧链保护的氨基酸,往往需要调整这种组合,而对于没有侧链保护的多肽序列,是需要加入98%TFA和2%水的溶液就可以完成,要灵活运用切肽试剂的组合。
多肽合成误区三:氨基酸的侧链保护都一样。带有活泼侧链的氨基酸在合成中需要保护,根据侧链的不同,保护基也有不同的选择。选择适当的保护基可以有效地减少合成的难度。
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