抗体筛选是开发单克隆抗体药物、ADC药物和双特异抗体等药物的必经之路。目前常见的抗体筛选方法有杂交瘤技术、噬菌体展示技术、单B细胞抗体筛选技术等。不同于传统的杂交瘤细胞技术或噬菌体展示技术，基于单B细胞筛选的新一代单克隆抗体开发平台能够快速获取具有生物学功能的全天然单克隆抗体。

经典免疫学背景知识

人和动物接受了外源性免疫原（如细菌、病毒、非同源蛋白等）的刺激后，获得性免疫（Adaptive Immunity）被激活，并在T淋巴细胞、巨噬细胞和树突状细胞等免疫细胞的协同作用下，由B淋巴细胞产生针对于该病原体（或免疫原）的抗体分子；B淋巴细胞经过一系列的成熟和分化之后，最终形成浆细胞（Plasma cell）将大量的IgG分泌到血液等循环系统中；而特定的某一个B淋巴细胞在经历了V-D-J重排、ClassSwitch和Somatic maturation之后，只含有一对编码IgG重链和轻链的基因。因此，经过B淋巴细胞表面标记物和抗原特异性筛选，可以获得针对特异性抗原的单个B淋巴细胞，然后通过分子生物学手段从中获得编码抗体IgG的重链和轻链基因，并在体外重组表达验证，这也是目前获得单克隆抗体最有效和快速的技术。

一、抗体筛选技术

1.1杂交瘤单克隆抗体

杂交瘤单克隆抗体技术起源于1975年，英法两国科学家将分泌抗体的鼠B淋巴细胞同具有无限扩增特性的骨髓瘤细胞融合形成兼具两者特性的杂交瘤细胞。相比于多克隆抗体，单克隆抗体具有高度的抗原识别特异性和蛋白生产的均一性，在已批准上市的治疗性抗体中，多数药物是采用基于小鼠的杂交瘤技术路线。

1.2噬菌体展示技术

噬菌体展示技术（phage display）是由 George P. Smith 于 1985 年开发的一种体外筛选抗体的方法。将不同的外源基因分别插入噬菌体载体中，随着噬菌体的传代，外源蛋白会展现在噬菌体表面，形成噬菌体文库。随后用特定蛋白对噬菌体文库进行筛选，便可快速得到与该蛋白具有高亲和力的抗体。该技术无需B细胞培养过程，但得到的抗体并非在B细胞中表达，可能导致构象改变，从而失去特异性。同时，重链和轻链的随机组合使得抗体重链轻链无法保持天然配对。

1.3单 B 细胞筛选技术

单个B细胞抗体技术作为新一代抗体开发技术，可以从单个B细胞中高效、快速的分离抗体，是继杂交瘤、噬菌体展示后又一抗体产生技术的突破。其基本原理是从免疫动物或患者的组织或外周血中分离抗原特异性B细胞，筛选出分泌目标抗体分子的B细胞，结合单细胞PCR技术 ，扩增出IgG重链和轻链可变区基因，构建表达载体，进行表达、纯化，筛选和鉴定，以获取有效功能性抗体。

二、达普生物Comet高通量筛选平台

达普生物 Comet 高通量筛选平台基于液滴微流控技术，通过荧光标记及介电泳力对油包水液滴进行高通量分选。分选前将单细胞与反应检测体系包裹成油包水微液滴，在液滴中实现 ELISA 检测，并基于反应体系荧光信号（即细胞功能）对阳性细胞液滴进行高通量分选，可依据细胞胞外分泌靶蛋白或胞膜或胞内生物标志物对功能性细胞筛选，将 ELISA 检测与流式分选整合为一体，摒弃传统费时费力的孔板法 ELISA 筛选。基于 Droplet ELISA 的功能细胞分选方式，单次可实现高达千万级反应液滴即百万级细胞分选，并可根据需要将阳性液滴打印至 96 孔板，自动保存对应孔的照片用于单克隆确认。相较于传统的抗体制备技术，该技术保留了丰富的基因多样性，重链轻链可变区天然配对，具有抗原特异性强、亲和性高、物种不受限、后续筛选工作量低等优势，大大节省人力和试剂成本，结合单细胞测试技术可直接获得抗体基因序列，方便下游抗体工程改造，在抗体药物研发、快速应对病原微生物传染病方面具有巨大优势。

三、达普生物Comet高通量筛选平台特点

达普生物 Comet 高通量筛选平台，可极大加速抗体药物开发流程，缩减研发及生产成本，该平台与目前市场上主流的基于微流控腔室技术的单细胞光导系统相比，有如下显著优势：

• 高通量：单次可实现高达千万级反应液滴即百万级细胞分选
• 速度快：将传统数周的功能单细胞筛选工作缩减至 1-2 天内完成
• 成本低：减少样本和试剂用量，试剂成本降至传统方法的百万分之一
• 可兼容：FRET法、磁珠法、微珠法、报告细胞法
• 更灵活：液滴生成后可灵活孵育条件、场所及显微观测
• 损伤：基于荧光标记和高压介电泳力对油包水液滴分选，对细胞无损伤

达普生物科技有限公司孵化于香港科技大学，于 2018 年由多位海归博士共同创立。在深圳、嘉兴、香港三地设有研发中心，研发团队近 100 人，建立了集微流控芯片、仪器及试剂生产为一体的 GMP 厂房。达普生物是中国液滴微流控领军企业，致力于提供世界领先的生命科学解决方案。达普生物已商业化多款基于液滴微流控技术的科学仪器，包括单细胞高通量筛选系统（Comet High ThroughputSorting System）、星海单细胞测序建库系统（ Galaxy Single CellAnalysis System）与星云数字 PCR 系统（Nebula dPCR System）。应用于癌症研究、癌症早期筛查、靶向治疗、无创产前诊断、病毒定量检测、高通量药物和抗体筛选等领域。上海金畔生物科技有限公司是达普生物的代理商，如对产品感兴趣，欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或者登录网站www.xmsjci.com了解更多信息。