腺相关病毒 (AAV) 是基因治疗中使用最广泛的传递机制。近年来，基于AAV病毒开发的基因疗法的研发及临床试验注册项目数量呈指数级增长，截至目前，美国FDA已批准五项AAV疗法，同时，用于基因治疗的AAV也是全球市场上最为昂贵的药物之一，其中售价最高的Hemgenix®，每剂价格约为350万美元。由于该疗法每剂量可能需要1011-1016载量的AAV病毒，如何实现高效的AAV生产，已成为工艺流程优化中的重要一环。
上海金畔生物科技有限公司代理的Mirus成立于1996年，在核酸递送领域深耕多年，TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂支持AAV及慢病毒(LV)从科研到GMP商业级别生产。不同于传统基于单组分的转染试剂(如阳离子聚合物聚乙烯亚胺，PEI)，Mirus将专利的多聚物及脂质技术进行多重组合，针对不同细胞类型，不同应用场景，有着不同转染方案。
Mirus专利递转平台Polymers + Lipids的多重、多功能组合
在病毒生产工艺方面，除了需要克服细胞递转过程中的多重阻碍，以实现更高效转染和更低细胞毒性；增强子的加入，还可大幅度提升多种血清型AAV病毒生产载量。但Mirus并没有止步于此，为了进一步提高下游生产中的AAV产量， 今年七月底上海金畔生物科技有限公司代理的Mirus发布用于AAV生产的RevIT™ AAV Enhancer，可搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂或其他品牌转染试剂 (如PEI等)。基于HEK293悬浮细胞数据，相对于老版本AAV增强子，RevIT™ AAV Enhancer可将AAV基因组滴度提高1.2-4.9倍，并且使用更便捷，非常容易整合入现有的AAV生产工艺流程中。Mirus RevIT™ AAV Enhancer的推出，使得AAV上游生产成本进一步降低成为可能，进而降低基因治疗药物单剂量成本。
RevIT™ AAV Enhancer
RevIT™ AAV Enhancer：可以将AAV基因组滴度提升1.2-4.9倍
实验结果显示，平行对比Mirus TransIT-VirusGEN®搭配老版本AAV增强子(VirusGen + Enh 1.0)和新版本RevIT™ AAV Enhancer (VirusGen + RevIT)，针对AAV2、AAV8、AAV9不同血清型，基因组滴度分别有着1.6、4.9以及1.2倍提升。除此之外，在测试的所有血清型中，使用RevIT™ AAV Enhancer也在不同程度上收获了更高比例的实心率 (图1)。该结果表明，在搭配Mirus TransIT-VirusGEN®转染试剂时，新版本增强剂RevIT™ AAV Enhancer可显著提高AAV基因组滴度(GC/mL)及实心率(%Full Capsids)。
图1 . 相比Mirus老版本增强子，加入RevIT™ AAV Enhancer后，可将AAV基因组拷贝数提升1.2-4.9倍，同时改善AAV病毒实心率。
RevIT™ AAV Enhancer具有广泛适配性，搭配其他品牌转染试剂（如PEI），AAV病毒基因组滴度有着显著提升
平行测试两个品牌转染试剂：Polyplus FectoVIR®转染试剂(“Polymer F”)以及Polyplus PEIpro®转染试剂(“Polymer P”)，在加入Mirus RevIT™ AAV Enhancer，针对不同血清型AAV2、AAV8、AAV9，AAV基因组滴度分别有着1.7-2.0x、1.7-2.2x、2.2-2.3x提升(图2)。实验结果表明，在搭配其他品牌病毒转染试剂时，Mirus RevIT™ AAV Enhancer也可显著提高AAV病毒基因组滴度(GC/mL)。
图2. “Polymer F”以及“Polymer P”病毒转染试剂搭配Mirus RevIT™ AAV Enhancer，针对不同血清型AAV，其病毒基因组滴度都有着显著提升。
RevIT™ AAV Enhancer具有广泛的适配性，可适用于不同培养基体系
Mirus TransIT-VirusGEN®转染试剂搭配RevIT™ AAV Enhancer，在不同品牌的病毒生产培养基中，具有很好的兼容性。测试使用293-VP 2.0细胞，搭配培养基类型包括VPM ( Fisher) 及 BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific)。实验结果表明，针对不同血清型AAV2、AAV5、AAV8、AAV9，RevIT™ AAV Enhancer在不同培养基实验条件下，AAV病毒基因组滴度提升方面并无显著差异（图3）。
图3. 更换不同品牌病毒生产培养基，AAV病毒基因组滴度的增加无显著差异。
RevIT™ AAV Enhancer实验流程更灵活，在转染的不同时间窗口加入有着近似表现
为了进一步确认加入RevIT™ AAV Enhancer来提高AAV产量是否需要严格把控加入时间，平行测试了不同加入的时间点，包括转染前30min或60min、转染时及转染后。实验结果显示，相比于对照组，在不同时间点加入RevIT™ AAV Enhancer， AAV8病毒基因组滴度均有稳步的提升(2倍)，并且病毒实心率也稳定保持在相同水平（图4）。该实验结果表明，RevIT™ AAV Enhancer加入时间点的灵活性，一定程度上简化了生产工作流。
图4. RevIT™ AAV Enhancer在转染的不同时间窗口加入有着近似表现
实验tips：如何进行病毒转染试剂评估？什么是病毒载量？如何检测？
更多详细信息，请查看Technical Resources中Virus Titer Reference Card ，更加详细地介绍了检测和计算病毒滴度的详细方法。
相关产品信息及链接
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产品名称 |
规格 |
货号 |
链接 |
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RevIT™ AAV Enhancer |
1.5 ml |
MIR 8000 |
link |
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10 x 1.5 ml |
MIR 8006 |
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VirusGEN® AAV转染试剂及RevIT™ AAV Enhancer |
For 1L of Culture |
MIR 8007 |
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For 10L of Culture |
MIR 8008 |
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TransIT-VirusGEN®转染试剂 |
0.3 ml |
MIR 6703 |
link |
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0.75 ml |
MIR 6704 |
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1.5 ml |
MIR 6700 |
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5 x 1.5 ml |
MIR 6705 |
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|
10 x 1.5 ml |
MIR 6706 |
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30 ml |
MIR 6720 |
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TransIT-VirusGEN® GMP级别转染试剂 |
150 ml |
MIR 6845-GMP |
link |
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VirusGEN® AAV转染试剂(套装) |
1 kit for 1 L of cell culture |
MIR 6750 |
link |
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VirusGEN® GMP级别AAV转染试剂(套装) |
1 Kit – for 50 L of cell culture |
MIR 6815-GMP |
link |
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VirusGEN® LV转染试剂(套装) |
1 kit for 1 L of cell culture |
MIR 6760 |
link |
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VirusGEN® GMP级别LV转染试剂(套装) |
1 Kit – for 50 L of cell culture |
MIR 6825-GMP |
link |
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Mirus产品年鉴
上海金畔生物科技有限公司代理的美国Mirus公司成立于1995年，是世界上很早开发高效、低毒转染试剂的公司，同时也是该类试剂的主要供应商之一。其产品线涵盖化学转染试剂、电转染产品、病毒生产和转导产品，适用于基因功能研究、蛋白生产、病毒载体生产和动物模型构建等领域。Mirus被公认为转染试剂开发的领跑者，其许多杰出成果获得世界公认与广大用户的好评。
上海金畔生物科技有限公司是Mirus中国区代理，始终秉承着专业、严谨的态度为客户提供优质的产品与服务，Mirus热销转染产品常备现货。如果您对上述产品感兴趣，欢迎致电上海金畔客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多产品信息。