Nanogold® 标记试剂如何降低背景？

减少背景染色有两种方法：（a）在银增强之前和期间修改实验条件;或（b）改善银增强反应的“停止”或在完成后应用回显影。

减少反应过程中的背景

在使用荧光素和纳米金®探针FluoroNanogold的组合实验中，发现在银增强之前用0.02 M柠檬酸钠缓冲液（pH 7.0）洗涤，其背景明显低于许多其他处理。当使用Danscher银增强剂进行开发时，发现这是有效的。当纳米探针 总部银色 使用0.02 M柠檬酸钠缓冲液在银增强前的pH 3.5下给予较低的背景。在免疫印迹中，我们发现银增强前的0.05 M二钠EDTA，pH 4.6也有助于最小化背景。

向Nanogold®孵育缓冲液中加入少量洗涤剂吐温-20有助于防止疏水相互作用，这可能是非特异性结合的另一个来源。如果样品可以耐受，用0.6 M三乙基碳酸氢铵缓冲液洗涤，其中纳米金®是高度可溶的，也可以降低背景。

“停止”反应和反向开发:

在大多数情况下，用去离子水或蒸馏水反复洗涤就足以停止银增强过程。然而，它可能会在标本内继续存在，这有时会在光学显微镜下导致过度显影或深色外观。在这种情况下，可以使用以下方法之一来“停止”银增强反应：

• 1%醋酸。

• 1%醋酸，然后是照相定影剂（Agefix，Agfa-Gevaert或Ilfospeed 200，Ilford）。

• 直接照片修复，使用刚才提到的那些。

• 用2.5%氯化钠短暂冲洗。

• 15-25%硫代硫酸钠水溶液加15%亚硫酸钠。

• 1%乙酸，在乙酸盐缓冲液中洗涤，在0.05%氯化氢中调色₄ 3-10分钟，用3%硫代硫酸钠除去多余的银。我们发现，在聚丙烯酰胺凝胶上运行的纳米金标记蛋白质在用10%乙酸和10%葡萄糖在水中停止时保持低背景，而不仅仅是水停止。

如果反应进行得太远，可以通过 Farmer 溶液（0.3 ml 7.5% 铁氰hua钾、1.2 ml 20% 硫代硫酸钠、60 ml 水）处理来“反向显影”以去除多余的背景染色.在金色调色之前将此溶液短暂地应用于您的样品可能有助于去除背景银沉积。