传代方法的概述

传代方法概述

1.消化传代：

        弃去培养基，PBS润洗一次后加入适量胰酶晃匀（以盖住细胞表面为宜），放入培养箱消化。细胞呈斑片状时加入等体积新鲜全培养基终止消化。吹打细胞后转移悬液至洁净离心管，600g离心5分钟。弃去上清，用新鲜培养基重悬细胞至培养瓶，补足培养液体积，移入培养箱培养。

2.直接传代：

         用吸管吸取细胞悬液的1/2～1/4至另一瓶中；加入适量的新鲜培养基，补足培养液体积，培养箱继续培养。

3.离心传代：

         将细胞悬液转移至离心管内，600 g 离心 5 min，弃去上清。使用新鲜的培养基重悬细胞至新的培养瓶，补足培养液体积，培养箱继续培养。

细胞冻存注意事项

细胞冻存步骤：

使用上述传代步骤至离心后，弃去培养基，用600μL~1mL冻存液重悬细胞后，转移细胞至冻存管。

无血清冻存液可直接冻于-80，否则采取梯度降温法冻存。

含血清冻存液成分：20％FBS、10％DMSO、70％1640培养液

细胞冻存需注意：

● 细胞数量过少可能导致复苏困难，应至少有5*105。

● 冻存时应处于对数生长期，状态不佳的细胞复苏困难。

● 尽量采用梯度降温并使用梯度降温盒。

● 冻存的细胞不可直接移入液氮，应-80冻存超过6小时后再液氮冻存。

● 冻存和复苏的时间间隔不宜过短，不可小于三天。