Duolink® PLA的实验对照

Duolink® PLA 结果为蛋白质事件（表达、相互作用或修饰）提供了相对定量。因此，加入技术对照组，以及在可能的情况下加入生物对照组，是十分重要的。

技术对照：

每个 Duolink® PLA 实验中应该包含两个技术对照组。这包括：

1.分别省略一种一抗

用于检测每种一抗的非特异性结合

有助于确定最佳一抗效价

2.省略所有一抗

用于检测系统中 Duolink® PLA 探针的非特异性结合

生物对照：

除了技术对照外，强烈建议使用生物对照。阳性和阴性生物对照均可提供有价值的信息。

1.阳性对照：

用含已知蛋白表达、相互作用或修饰的单独样本来测试试剂

可诱导系统（如生长因子刺激、热休克等）的使用将提供Duolink® PLA信号的生物学相关性

2.阴性对照：

使用不表达蛋白质靶标的样品（例如敲除、沉默等）将提供一抗特异性的信息

使用不相关抗体（例如同种型 IgG、非相互作用蛋白的抗体等）将提供关于Duolink® PLA 探针特异性的信息

使用阻止蛋白质相互作用或修饰的抑制剂将提供 Duolink® PLA 信号的生物学相关性  

优化 Duolink® 邻位连接实验的补充！

封闭液和抗体稀释剂：

Duolink®封闭液和抗体稀释剂含有 Duolink® PLA 探针（PLUS和MINUS）。这些溶液已进行优化，可与Duolink® PLA试剂配合使用，以最大限度地减少抗体和检测寡核苷酸的非特异性结合。然而，在这些条件下，必须验证您的一抗与目标蛋白靶标的特异性结合。应通过 Duolink® PLA 单一识别实验，或者 IF 或 IHC 来分别检测每种一抗。

如果您之前已经确定了用于IF 或 IHC 染色的封闭液和/或抗体稀释剂，则这些溶液很可能也可用于 Duolink® PLA。在这些溶液中不应该使用来自与您的一抗相同物种的同种型 IgG 作为封闭液，因为这将导致来自 Duolink® PLA 探针的错误信号。