Duolink® PLA荧光实验方案

Duolink® PLA试剂

有关具体的产品建议，请参阅Duolink® PLA产品选择指南。简单来说，要运行用于荧光检测的Duolink® PLP实验，需要以下Duolink® PLA产品：

一、Duolink® PLA探针（一种PLUS和一种来自不同物种的MINUS，与您的一抗宿主物种相匹配）。每个试剂盒包括：

1.PLA探针（5x）— PLUS和/或MINUS，取决于产品；

2.封闭溶液 — 用于在孵育抗体前封闭样品；

3.抗体稀释剂 — 用于稀释PLA探针，而且如果需要，用于稀释一抗。

注意：将试剂盒的所有组分存放在4°C温度下。

注意：如果需要，可用Duolink® PLA试剂盒生成定制的PLA探针。

二、Duolink®荧光检测试剂（可选择绿色、橙色、红色等）

每个试剂盒包括：

1.连接原液（5x） – 稀释以制备1x连接缓冲液

2.连接酶 (1 U/μL) – 添加以制备连接溶液

3.扩增原液 (5x) – 稀释以制备1x扩增缓冲液

4.聚合酶 (10 U/μL) – 添加以制备扩增溶液

注意：将所有组分存放在-20°C温度下。

三、荧光用洗涤缓冲液。

四、含DAPI的Duolin封固剂用于载玻片，储存在2-8°C）或者细胞核染色剂和抗淬灭剂（用于微孔板，储存在-20°C）

其他材料!

1.检测目标蛋白质的一抗。当与Duolink® PLA探针一起使用时，必须在小鼠、兔子或山羊中饲养。

2.高纯度纯水（无菌过滤，Milli-Q®或类似水质）

3.载玻片上的样品（细胞或组织），已经过固定、恢复和透化方面的预处理。关于下列主题的相关建议和详细信息，请参阅如何优化Duolink®邻近连接测定：

1.实验设计和对照

2.选择一抗和优化

3.样品处理

设备

1.荧光显微镜，带有适当的滤光片、照相机和图像采集软件

2.37°C培养箱

3.水平摇床

4.加热湿度箱或微孔板传热座

5.疏水笔，用于给反应区域划界

6.冰块（用于酶）

7.染色罐

8.镊子

9.移液器和吸头（1 μl至1000 μl）

10.与荧光显微镜兼容的盖玻片