如何提取游离DNA?
cfDNA 的分离、定量和评估并不是一项简单的任务。它需要敏感且可靠的工作流程。
cfDNA 是一种极其难以处理的样品类型,因为 cfDNA 的产量通常有限且高度碎片化。这就是 MagVigen™ cfDNA 提取试剂盒(货号 #K61003)发挥作用的地方。它可以为 NGS 检测提供更高产量和更高质量的 cfDNA 样本(相对于 Qiagen 试剂盒)。
cfDNA 提取工作流程
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1.溶解:溶解等离子体样品。
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2.结合和捕获:将 MagVigen™ 纳米颗粒与样品混合。纳米颗粒与 cfDNA 片段结合。
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3.沉淀和重新分散 1:磁性沉淀珠子直至溶液澄清。珠子响应磁力(通过使用磁铁,例如磁力分离架),使结合的材料能够快速有效地与样品的其余部分分离。通过抽吸除去上清液(未结合的材料),剩下的是纳米颗粒结合的目标。然后将珠粒重新分散在洗涤 1 缓冲液中。
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4.转移:将洗涤 1 溶液转移至 1.5 或 2ml 管中。
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5.沉淀和重新分散 2:磁力沉淀,按照步骤 3 去除上清液。这次将珠粒重新分散在 75% 乙醇中。
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6.清洗和沉淀 2,3:使用 75% 乙醇清洗珠粒。将珠子沉淀并除去所有上清液。将珠粒重新分散在 75% 乙醇中。执行此步骤两次。
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7.洗脱:高质量 cfDNA 的最终洗脱。为下游 NGS、PCR 或其他应用做好准备。
2次洗脱有助于提高cfDNA产量。