检测抗体的通用 ELISA 程序（滴定）

注意事项：

1 该 ELISA 程序适用于针对纯化抗原（蛋白质或肽）产生的抗体的定性检测。这并不是为了测量血清或其他液体中的抗体浓度而设计的。

2 该程序假设一抗是在兔子中产生的。如果使用其他宿主动物，则需要使用适当的第二抗体。  

涂层：

1. 配制 1-10 ug/ml 溶液。包被缓冲液中的抗原（肽或蛋白质）（不储存稀释的抗原）。

2. 分配 100 ul 抗原溶液，包被高结合 ELISA 条板（目录号 80112）。每口井。用粘合膜覆盖板。在室温下孵育 2-6 小时或在 4°C 下孵育过夜，同时轻轻摇动轨道。

3. 吸出溶液并用洗涤缓冲液洗涤板 2 次。

封闭：

1. 通过从储备液中稀释来制备封闭缓冲液。每孔分配 300 ul，将板在室温下孵育 2-6 小时或在 4°C 下轻轻混合过夜。

2 吸出封闭缓冲液。并轻拍纸巾以除去所有溶液。该板可直接用于测定或在密封袋中保存在 4oC 下以备将来使用。

抗体测定：

1. 用抗体/结合物稀释液稀释免疫前血清和免疫血清（连续稀释 1:100、1:1K、1:10K、1:100K）。将 100 ul 每种抗体和免疫前稀释液分配到抗原包被的孔中。

2. 用粘合膜覆盖板。在室温下孵育 30 分钟，并轻轻摇动轨道。

3. 吸出溶液并用洗涤缓冲液洗涤板 5 次（每次洗涤应使用 200-300 ul 洗涤缓冲液；洗涤不当会导致高背景）。

4. 用抗体缀合物稀释剂稀释抗兔 IgG-HRP 缀合物 (1:5K-1:20K)。每孔分配 100 ul 结合物（结合物稀释不当可能导致颜色过低或背景过高）。

5. 用粘合膜覆盖板。在室温下孵育 30 分钟，并轻轻摇动轨道。

6. 吸出板并用洗涤缓冲液洗涤板 5 次。轻拍纸巾以除去所有溶液。

7. 每孔分配 100 ul 的即用型 TMB 底物溶液。

8. 用粘合膜覆盖板。在室温下孵育长达 15 分钟，并轻轻摇动轨道。阳性孔中会出现蓝色。

9 分配 100 ul 稀释溶液。每口井。蓝色将变成黄色。

10. 读取 450 nm 处的吸光度。  

注意：所有试剂必须使用新的吸头和试剂储液器进行分配。 ELISA 所需的所有试剂（除特定抗原或抗体外）都可以方便地以试剂盒形式购买。  

目录# 产品描述

80150 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的小鼠抗体，75 分钟

80155 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的大鼠抗体，75 分钟

80160 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的兔抗体，75 分钟

80165 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的山羊抗体，75 分钟

80166 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的绵羊抗体，75 分钟

80170 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的人抗体，75 分钟

80171 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的 G. Pig 抗体，75 分钟

80175 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的猴抗体，75 分钟

80176 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的鸡抗体，75 分钟

80180 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的仓鼠抗体，75 分钟

80185 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的牛抗体，75 分钟

80186 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的猪抗体，75 分钟

80187 ELISA 试剂盒，用于检测血清中的火鸡抗体，75 分钟

该试剂盒包含所有试剂，包括包被缓冲液、洗涤缓冲液、抗体/缀合物稀释剂。 TMB 底物、终止液、抗兔 IgG-HRP 缀合物；提供足够的试剂进行 1000-2000 次测试或 10-20 ELISA 板）。请根据一抗宿主获取试剂盒。上述试剂盒可用于测定针对给定抗原的抗体滴度。它们不适合测定血清中的抗体（IgG、IgA 或 IgM）浓度。