bigelow培养方法介绍

培养基类型

富集培养基和人工培养基是培养基的两种主要类型。富集培养基通常通过以下两种方式制备：(1) 通过将土壤或土壤提取物添加到蒸馏水或天然水中，或 (2) 通过将营养化学品添加到天然水（例如海水或湖水）中。人工介质仅使用“纯”水和“纯”化学品；它不包括添加未定义的土壤或天然湖泊或海水。然而，认识到即使是精心制备的人工培养基中也存在未知的“杂质”，这一点非常重要。

富含土壤和水的介质适合维持藻类培养。良好的土壤提供无机和有机物质——藻类生长良好，并且培养引起的形态变化是有限的。

通过化学浓缩海水制备的海洋介质很常见。然而，使用湖水或河水进行化学富集的淡水培养并不常见。相反，人工培养基对于许多淡水藻类的生长来说很常见并且非常成功，但仅当无法使用天然海水基础进行关键研究时才使用海洋人工培养基。例如，出于研究微量元素的目的，使用精心定义的人造海水介质来最小化或排除已知污染物。

类似地，水质、玻璃/塑料器皿清洁度等以与化学质量相同的方式影响培养基，即不良或有毒物质的存在以及所需物质的缺乏会影响藻类生长。培养基和培养容器可以通过蒸汽高压灭菌、巴氏灭菌、过滤或微波进行灭菌。

培养容器和材料

用于培养培养物和储存培养基的所有容器和管道均应仔细选择，以避免有毒化合物。我们推荐使用硼硅酸盐玻璃或组织培养级聚碳酸酯和聚苯乙烯塑料器皿制成的烧瓶和试管。黑色试管螺帽应在海水变化时高压灭菌几次，因为新瓶盖在加热时可能会释放出有毒的酚类物质。

同样，橡胶塞（或任何其他在加热时释放有气味的挥发性化合物的东西）应与介质分开进行高压灭菌。应避免使用带有铜管的老式高压灭菌器，因为过量的铜对藻类有毒。高压灭菌器蒸汽本身可能被金属污染，并且培养基可能对开放海洋物种产生金属毒性。

新的玻璃器皿应在稀 NaOH 中脱脂。玻璃器皿可以定期用稀盐酸清洗，或者，如果担心金属污染，建议在浓盐酸中长时间浸泡。玻璃器皿不应该用铬酸清洗，因为铬对许多浮游植物有毒。烧瓶可以用用粗棉布、硅胶海绵包裹的棉塞或用烧杯盖住的塞子盖住。由箔或塑料烧杯制成的盖可以防止真菌在潮湿的塞子中生长。

大多数科学家在准备培养物时会丰富天然海水。海水来源可能会影响成功。一些沿海水域的盐度降低，某些菌株可能无法忍受。NCMA 使用来自缅因湾的原始水，其盐度约为 32 psu。在水华期间不应收集海水，特别是当存在有毒生物时。可以使用过滤器（例如 0.45 µm 玻璃纤维过滤器）去除天然浮游植物。可以通过添加来去除溶解的有机污染物每升加入一到几克活性炭粉末并充分混合。第二天通过倾析和过滤除去碳。

为了简化常规培养基制备，通常制备工作储备溶液。添加少量液体储备溶液比称量单个干化学品更容易、更快捷。最好将原液添加到水中并混合 – 直接混合原液而不用水稀释可能会导致不良沉淀。营养强化剂要么在灭菌前添加，要么在灭菌后无菌添加。灭菌是通过在 121°C、15 lb/in2 下高压灭菌 15 分钟或更长时间来完成，具体取决于所涉及的体积。高压灭菌后应尽快冷却培养基以避免沉淀。二氧化硅可以增强沉淀，因此如果藻类不需要硅，最好将硅酸盐排除在培养基之外。

营养物质可能会被细菌或真菌污染。因此，谨慎的做法是首先对原液进行高压灭菌，然后采用良好的无菌技术。应仔细密封储备溶液，因为蒸发会浓缩营养储备。维生素库存可以冷冻很长时间而不会明显降解。在玻璃容器中高压灭菌 Na2SiO3 储备溶液可能会导致二氧化硅蚀刻或碎片状沉淀。因此，我们建议在聚四氟乙烯涂层瓶中制备硅酸盐储备溶液。

高压灭菌后，培养基应放置约 24 小时，同时气体（尤其是 CO2）扩散到液体中。通过快速冷却可以最大限度地减少沉淀。对于大多数海水介质来说，最终 pH 值为 7.8-8.2 是理想的。