CytoTrace 红色荧光探针保留了Cy3 / TRITC的光谱特性，因此可以使用荧光显微镜或流式细胞仪轻松检测其信号。它自由地穿过细胞膜，并在与细胞成分反应后转化为不渗透细胞的产物。细胞不渗透的反应产物经过数代传给子细胞，但没有转移到群体中的相邻细胞。装有CytoTrace Red探针的细胞通常可以发出荧光，并且至少可以存活24小时，这使该探针成为了出色的长期细胞示踪剂。染色图案可以用甲醛或戊二醛固定，用于信号放大和其他应用。它的光谱与GFP或FITC标记的抗体的光谱很好分离。

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操作步骤

该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

1.准备2-10 mMDMSO储备溶液

对于＃22014添加45微升DMSO成50 μ 克小瓶使2mM的储备溶液（1毫克/毫升，相当于1.8毫摩尔）;

对于＃22015添加36微升DMSO成50 μ 克小瓶制成10mM储备溶液（1毫克/毫升，相当于1.46毫摩尔）;

对于＃22016，添加153 uL ml DMSO以制成10 mM储备溶液（1 mg / ml相当于1.53 mM）；

对于＃22017，添加215μLDMSO以制成10 mM储备溶液（1 mg / ml相当于2.15 mM）;

对于＃22020，将4.2 mg溶于1 ml DMSO中制成10 mM储备溶液（1 mg / ml相当于〜2.4 mM）；

注意：储备溶液应及时使用；应将所有剩余的溶液等分并在< -20 ^o C下冷冻。避免重复冻融循环，并避光

2.准备染料工作液

在使用前，通过用Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的pH 7缓冲液稀释步骤1中的DMSO储备溶液，准备好1至20 µM的染料工作溶液。

3.用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：

3.1用测试化合物处理细胞所需的时间。

3.2离心细胞，每管得到2-10 x10⁵细胞。

3.3将细胞重悬于500 µL 的染料工作溶液中（来自步骤2）。

3.4将细胞与染料溶液在室温或37° C下避光放置15至30分钟。

3.5从细胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500 µL预热的HHBS或培养基中，每管可得到2-10 x 10 ^5个细胞。

3.6用流式细胞仪（FL1通道） 或荧光显微镜监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光变化。

注意：对于细菌细胞染色：将母液在通过测试细菌过夜生长而预先调节的营养肉汤中以1：800的比例稀释时，染色是有效的，但是也可以使用新鲜的营养肉汤或PBS。细菌悬浮液应用PBS稀释至10⁵ – 10 ⁷每毫升。将1 ml溶液加到.45 µm过滤器（25mm）上并真空过滤除去溶液，然后加入1ml染料溶液并在室温下孵育5-10分钟，即可对细菌染色。

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