胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物Ac-LEHD-AMC 蓝是美国AAT Bioquest生产的荧光底物，Caspase 9是半胱氨酸蛋白酶家族中CED-3亚家族成员，在凋亡起始阶段占有必要地位。这些酶主要具有特异的保守性区域，并特异的切开识别位点后面的天冬氨酸残基。起始凋亡蛋白酶（例如caspases-8）效应蛋白酶，例如caspase-3或者-7。这些效应蛋白酶然后酶切细胞底物导致凋亡的形态学改变。AC-LHED-AMC是caspase-9选择性荧光底物。Caspase-9酶切水解特异性底物AC-LHED-AMC，导致释放AMC荧光集团，其激发波长是365nm,发射光波长为450nm。这个实验的准备试验缓冲液包含50nM MES，pH6.5,10%PEG8000, 0.1% CHAPS, 5 mM DTT, and 1 mM EDTA.。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物Ac-LEHD-AMC 蓝。

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样品实验方案

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物（50μM）测定溶液，如下所示：

50 uL基质原液

100L DTT（1M）

400L EDTA（100 mM）

10mL Tris缓冲液（20mM），pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤1.2）混合，并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光，或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液（HHBS）稀释Hanks中的DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X可渗透的半胱天冬酶底物（20μM）测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤2.3）混合等体积的处理细胞，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针（仅适用于＃13470-13476）

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液（来自步骤3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL细胞）添加到细胞溶液中，并将细胞在37°C，5％CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

参考文献

Structure-dependent induction of apoptosis by hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids in the human hepatoma cell line HepaRG: Single versus repeated exposure
Authors: Julia Waizenegger, Albert Braeuning, Markus Templin, Alfonso Lampen, Stefanie Hessel-Pras
Journal: Food and Chemical Toxicology (2018)

pH-Assisted surface functionalization of selenium nanoparticles with curcumin to achieve enhanced cancer chemopreventive activity
Authors: Shaoxuan Yu, Yanru Wang, Wentao Zhang, Yuhuan Zhang, Wenxin Zhu, Yingnan Liu, Daohong Zhang, Jianlong Wang
Journal: RSC Advances (2016): 72213–72223