活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 橙色荧光-AAT Bioquest荧光染料

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活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 橙色荧光 价格 2823
产品规格

200 Tests

产品货号

活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 橙色荧光

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
存储条件
产品概述

活性氧(ROS)是氧正常代谢的天然副产物,在细胞信号传导中起重要作用。 ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管疾病,糖尿病,骨质疏松症,中风,炎性疾病,许多神经退行性疾病和癌症中的作用已得到公认。 ROS测量将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。 Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒使用我们专有的ROS Brite 570指示剂来定量活细胞中的ROS。与ROS反应后,可渗透细胞且无荧光的ROS Brite 570表现出很强的荧光信号。 ROS Brite 570指示剂位于细胞质中。 ROS Brite 570指示剂的荧光信号可以通过荧光显微镜,高通量筛选,荧光酶标仪或流式细胞仪进行检测。 Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法,可在孵育1小时内检测活细胞中的细胞内ROS(尤其是超氧化物和羟基自由基)。可以使用荧光酶标仪或带有TRITC滤光片的荧光显微镜以方便的96孔或384孔板形式进行检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒。

活性氧(ROS)篇:包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

 

适用仪器


流式细胞仪  
Ex: 488 nm or  532 nm 
Em: 575/26 nm  
通道: PE 通道

 


荧光显微镜

Ex: TRITC 滤波片组
Em: TRITC 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 


荧光酶标仪

 
Ex: 540 nm
Em: 570 nm
Cutoff: 550 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式
实验方案

样品实验方案

简要概述

(适用于荧光显微镜、荧光酶标仪)

1.在生长培养基中准备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS

3.添加ROS Brite 570工作溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)

4.将细胞在37°C下染色30-60分钟

5.在Ex / Em = 540/570 nm(截止= 550 nm)或配备TRITC滤光片的荧光显微镜下检测荧光的增加(底部读取模式)

(流式细胞仪)

1.在生长培养基中准备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.将ROS Brite 570与细胞一起孵育30-60分钟
4.使用带有FL2通道的流式细胞仪检测荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. ROS Brite 570储备溶液(500X):将40 µL DMSO(组分C)添加到ROS Brite 570(组分A)小瓶中,并充分混合以制成500X ROS Brite 570储备液,避光。 注意:20 µL 500X ROS Brite 570储备溶液足以用于1个板。 对于流式细胞仪,为方便起见,可以将5倍ROS Brite 570储备液稀释5倍至DMSO中的100倍。 为了存放,请将管子紧紧密封。

 

工作溶液配制

将20 µL的500X ROS Brite 570储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液(组分B)中,并充分混合以制成ROS Brite 570工作溶液。 注意:此ROS Brite 570工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.针对荧光显微镜和荧光酶标仪:

1.1在所需的缓冲液(例如PBS或HHBS)中,用10 µL 10X测试化合物(96孔板)或5 µL 5X测试化合物(384孔板)处理细胞。 对于对照孔(未处理的细胞),添加相应量的化合物缓冲液。

1.2要诱导ROS,请在室温下或在5%CO2、37°C的培养箱中孵育细胞板(例如:用100 µM氢过氧化叔丁基(TBHP)处理Hela细胞30分钟)。

1.3将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的ROS Brite 570工作溶液添加到细胞板中。

1.4将细胞在5%CO2、37°C的培养箱中孵育30分钟至60分钟。

1.5使用荧光酶标仪(Ext / Em = 540/570 nm(截止= 550nm))检测荧光的增加,或使用带有TRITC滤光片组的荧光显微镜检测细胞。

2.针对流式细胞仪:

2.1准备从5×105到1×106细胞/ mL的密度的细胞。 注意:应根据个体情况评估每种细胞系,以确定诱导凋亡的细胞密度。

2.2在所需的缓冲液(例如PBS或HHBS)中用测试化合物处理细胞。 对于对照孔(未处理的细胞),添加相应量的化合物缓冲液。

2.3要诱导ROS,请在室温下或在5%CO2、37°C的培养箱中孵育细胞板至少30分钟(如对于用100 µM氢过氧化叔丁基(TBHP)处理的Hela细胞,则需30分钟) )。

2.4向细胞培养基中加入1 µL / mL的500X ROS Brite 570储备液细胞或5 µL / mL的100X ROS Brite 570储备液细胞。

注:1µL/mL 表示每毫升细胞培养基中添加的ROS Brite 570储备液体积为1微升。这个浓度是相对于细胞培养基的总体积而言的,因此也可以说是在每升细胞培养基中添加1毫升ROS Brite 570储备液。这种浓度通常用于细胞实验中,以使得实验物质与细胞有良好的相互作用,同时不会对细胞造成太大的毒性影响。该浓度仅为初学者进行指导,请根据自己的实际情况,调整浓度,优化自己的实验。

2.5将细胞在5%CO2、37°C的培养箱中孵育30至60分钟。

2.6使用带有FL2通道的流式细胞仪检测荧光强度。

 

参考文献

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