Amplite 荧光细胞外一氧化氮(NO)活性测定试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光细胞外一氧化氮(NO)活性测定试剂盒价格 4957
产品规格

100 Tests

产品货号

Amplite 荧光细胞外一氧化氮(NO)活性测定试剂盒

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
存储条件
产品概述

Amplite 荧光细胞外一氧化氮(NO)活性测定试剂盒美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞外一氧化氮活性的试剂盒,一氧化氮(NO)是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。改变的NO产生涉及各种免疫,心血管,神经变性和炎性疾病。作为自由基,NO被快速氧化,并且生物系统中存在相对低浓度的NO。AAT Bioquest提供一组NO检测试剂盒,用于监测活细胞中的NO。这种Amplite 细胞外荧光一氧化氮定量试剂盒提供了一种快速监测细胞外介质,组织和其他生物溶液和样品中NO水平的方法。与常用的DAF-2探针相比,DAW-J2在我们的试剂盒16365中用作细胞非特异性NO传感器.DAW-J2仅在细胞外环境中检测一氧化氮,具有高灵敏度和高选择性。非荧光DAW-J2探针与NO反应产生强烈红色荧光产物,可以使用酶/读数器在Ex / Em = 570 / 610nm下方便地监测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 荧光细胞外一氧化氮(NO)活性测定试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
Ex: 570 nm
Em: 610 nm
Cutoff: 590 nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

样本实验方案

概述

1.准备一氧化氮工作溶液(50 µL)
2.加入一氧化氮标准液或测试样品(50 µL)
3.在室温下孵育30-60分钟
4.监控荧光强度

 

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 DAW-J2储备溶液(200X):
将25 mL DMSO加入小瓶DAW-J2(组分A)中,制成200X储备溶液。

1.2 一氧化氮标准溶液(100 mM,未提供):
我们使用DEA NONOate(Cayman Chemical,货号82100,CAS#372965-00-9)作为一氧化氮标准。 一氧化氮的标准溶液在0.01N NaOH中的浓度为100 mM。

 

2.标准溶液

一氧化氮标准
将10 µL 100 mM NONOate标准溶液添加到990 uL分析缓冲液(组分B)中,以生成1 mM一氧化氮标准溶液(SD7)。然后进行1:2系列稀释,以得到系列稀释的一氧化氮标准液(SD6-SD1)。注意:稀释的NONOate标准溶液不稳定,应立即使用。

 

3.工作溶液

将25 µL DAW-J2 200X储备溶液加入5 mL的测定缓冲液(组分B)中并充分混合。 注意:此一氧化氮工作溶液足以进行100次测定。工作溶液不稳定,请及时使用,并避免直接暴露在光线下。

 

样品操作及实验分析

表1:黑色96孔微孔板中一氧化氮标准品和测试样品的布局。 SD =标准,BL =空白对照,TS =测试样品

BL BL TS TS
SD1 SD1
SD2 SD2
SD3 SD3    
SD4 SD4    
SD5 SD5    
SD6 SD6    
SD7 SD7    

表2:每个孔的试剂组成

容积 试剂
SD1-SD7 50ul 连续稀释(15.6至1000 µM)
BL 50ul 分析缓冲液
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和表2提供的布局,将一氧化氮标准液(SD),空白对照(BL)和测试样品(TS)制成黑色96孔微孔板。对于384孔板,请使用25 µL 每孔试剂,而不是每孔50 µL。

2.将50 µL一氧化氮工作溶液添加至标准液,空白对照和测试样品的每个孔中,以使一氧化氮总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板,请在每个孔中使用25 µL工作溶液,总体积为50 µL /孔。

3.避光保存,室温下孵育反应30分钟至1小时。

4.使用荧光酶标仪在激发= 570 nm,发射= 610 nm(截止= 590 nm)下监控荧光的增加。

 

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12