Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×10⁶细胞/ mL）
2.加入1 µL 500X Nitrixyte NIR
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR在37ºC下孵育所需的时间
4.使用APC通道通过流式细胞仪分析细胞

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照储备液（50 mM）：
将200 uL ddH₂O加入小瓶NONOate阳性对照（组分B）中，制成50 mM NONOacte阳性对照处理原液。

2.工作溶液

用测定缓冲液（组分C）稀释50 mM NONOate阳性对照原液，制成1-2 mM NONOate阳性对照工作溶液。

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样品操作及实验分析

1.对于每个样品，在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中以5×105至1×106细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导NO的佳细胞密度。

2.将1 µL 500X Nitrixyte NIR（组分A）加入0.5 mL细胞悬液中。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用Nitrixyte NIR孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR在37ºC下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37°C的细胞培养基中将Raw 264.7细胞与Nitrixyte NIR工作溶液，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

4.旋转已用Nitrixyte NIR预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37ºC下再孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

5.使用流式细胞仪监测APC通道（Ex / Em = 640/675 nm）的荧光强度。

参考文献

The Selective Acetamidine-Based iNOS Inhibitor CM544 Reduces Glioma Cell Proliferation by Enhancing PARP-1 Cleavage In Vitro
Authors: Marialucia Gallorini, Cristina Maccallini, Alessandra Ammazzalorso, Pasquale Amoia, Barbara De Filippis, Marialuigia Fantacuzzi, Letizia Giampietro, Amelia Cataldi, Rosa Amoroso
Journal: International Journal of Molecular Sciences (2019): 495

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
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Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
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