Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测亚硝酸盐的试剂盒，过氧亚硝酸盐（ONOO-）是强氧化物质和高活性硝化剂。过氧亚硝酸盐由超氧化物自由基与细胞内产生的一氧化氮之间的反应形成。它可以对多种生物分子造成损害，包括蛋白质，酶，脂质和核酸，最终导致细胞死亡。同时，过氧亚硝酸盐还可以通过促进针对入侵病原体的宿主防御反应而在体内具有保护活性。因此，过氧亚硝酸盐是涉及生理和病理过程的一系列基本生物氧化剂。由于其半衰期极短且稳态浓度低，因此检测和了解过氧亚硝酸盐在生物系统中的作用一直具有挑战性。 AAT Bioquest的DAX-J2 PON Green专为满足这种需求而开发。它提供了一种敏感的工具来监测活细胞中的ONOO水平。AAT Bioquest 的 DAX-J2™ PON Green 与细胞间 ONOO- 发生特异性反应，生成亮绿色荧光产物。它可用于荧光成像、流式细胞术和基于荧光酶标仪的检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 绿色荧光 。 

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.将细胞与测试化合物和DAX-J2 PON Green工作溶液共同孵育
3.监测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 DAX-J2 PON绿色库存解决方案（500X）：
向DAX-J2 PON Green小瓶（组分A）中添加20 µL DMSO（组分C）。 注意：20 µL的复配DAX-J2 PON Green储备溶液足以装满1个板。

2.工作溶液

将10μL的500X DMSO重构的DAX-J2 过氧亚硝酸盐传感器储备溶液添加到500μL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。 注意：工作解决方案不稳定； 使用前根据需要进行准备。

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样品操作及实验分析

1.在90 µL（96孔板）或22.5 µL（384孔板）中添加10 µL /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的DAX-J2 PON Green工作溶液。细胞板中每孔的细胞培养。注意：染色前无需清洗细胞。建议用完全培养基染色细胞。

2.将DAX-J2 PON Green与测试化合物在完全培养基中或在所需缓冲液中的37°C下共孵育细胞一段时间，并避光。对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。注意：建议用完全培养基染色细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在染色前将生长培养基和血清因子吸掉。加入90 µL /孔（96孔板）和22.5 µL /孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液。或者，可以在无血清培养基中对细胞进行染色。我们将RAW 264.7巨噬细胞与50-200 µM SIN-1和DAX-J2 PON Green在完全培养基中于37°C共同孵育1小时，以诱导亚硝酸盐。有关详细信息，请参见图1。

3.或者，用DAX-J2 PON Green在37°C避光的环境下染色细胞1小时。除去工作溶液，然后在完全培养基中或在所需的缓冲液中于37°C用测试化合物处理细胞所需的时间。

4.使用酶标仪在Ex / Em = 490/530 nm（截止波长= 515 nm）下以底部读取模式监控荧光的增加，或使用带有FITC滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Gene silencing of endothelial von Willebrand Factor attenuates angiotensin II-induced endothelin-1 expression in porcine aortic endothelial cells
Authors: Anar Dushpanova, Silvia Agostini, Enrica Ciofini, Manuela Cabiati, Valentina Casieri, Marco Matteucci, Silvia Del Ry, Aldo Clerico, Sergio Berti, Vincenzo Lionetti
Journal: Scientific Reports (2016)

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