MitoROS 线粒体活性氧荧光探针580是美国AAT Bioquest生产的用于检测线粒体活性氧的荧光探针，活性氧（ROS）是含氧的化学反应性分子。实例包括超氧化物，羟基，单线态氧和过氧化物。由于存在不成对的价电子，ROS具有高反应性。 ROS形成氧的正常代谢的天然副产物，并且在细胞信号传导和体内平衡中具有重要作用。然而，在环境压力（例如，UV或热暴露）期间，ROS水平可显着增加。这可能导致细胞结构的显着损害。累积地，这被称为氧化应激。 MitoROS 580是一种超氧化物敏感染料，在加载到活细胞后定位于线粒体。超氧化物氧化MitoROS 580会产生红色荧光。 MitoROS 580可用荧光显微镜或荧光流式细胞仪监测线粒体中的超氧化物。 MitoROS 580试剂渗透活细胞，选择性地靶向线粒体。它被超氧化物迅速氧化。它不太可能被其他活性氧（ROS）和活性氮物质（RNS）氧化。氧化产物在细胞中高度荧光。 MitoROS 580为研究各种病理中的氧化应激提供了有价值的工具。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的MitoROS 线粒体活性氧荧光探针580。 

活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

使用MitoROS 580分析方案

该协议仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改。在制作MitoROS 580工作溶液之前，根据需要处理细胞。

溶液配制

1）MitoROS 580 原液 (1000X)配制

将 13 µL DMSO 添加到 MitoROS 580 小瓶中并充分混合。注意：未使用的原液可以储存在 -20 oC，避光保存。

2）MitoROS 580 工作溶液（2X）配制

用 20 mM Hepes 缓冲液 (HHBS) 将 DMSO 原液稀释到 Hanks 溶液中，制成 2X 工作溶液。注意：2X MitoROS 580 工作液不稳定，请及时使用。

操作步骤

1.细胞培养

2.将细胞（例如 96 孔板中的 100 µL/孔）与等体积的 2X MitoROS 580 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分钟，避光。 注意：MitoROS 580 的终细胞浓度不应超过 1 X。浓度超过 1 X 会产生细胞毒性效应，包括线粒体形态改变和荧光重新分布到细胞核和细胞质中。 注意：不同细胞对 MitoROS 580 的反应不同，请相应调整工作浓度。

3.轻轻清洗细胞 3 次，并用 HHBS 缓冲液替换。

4.使用适当的荧光仪器 (例如, 荧光显微镜、流式细胞仪) 观察细胞。（Ex/Em = 510/580 nm）

参考文献

Intracellular Fenton Reaction based on Mitochondria-Targeted Copper (Ⅱ)-Peptide Complex for Induced Apoptosis
Authors: Xia Li, Sijia Hao, Ailing Han, Yayu Yang, Guozhen Fang, Jifeng Liu, Shuo Wang
Journal: Journal of Materials Chemistry B (2019)

The contribution of oxidative stress to platelet senescence during storage
Authors: Li Wang, Rufeng Xie, Zhijia Fan, Jie Yang, Wei Liang, Qiang Wu, Mei X Wu, Zhicheng Wang, Yuan Lu
Journal: Transfusion (2019)

Carbon monoxide poisoning–induced delayed encephalopathy accompanies decreased in microglial cell numbers: distinctive pathophysiological features from hypoxemia–induced brain damage
Authors: Keisuke Sekiya, Tasuku Nishihara, Naoki Abe, Amane Konishi, Hideyuki Nandate, Taisuke Hamada, Keizo Ikemune, Yasushi Takasaki, Junya Tanaka, Migiwa Asano
Journal: Brain research (2018)