MitoLite 线粒体橙色荧光探针是一种阳离子染料，可以通过线粒体膜电位梯度选择性地积聚在线粒体中。线粒体指示剂是一种疏水性化合物，很容易透过完整的活细胞，并在进入细胞后被线粒体捕获。这种荧光线粒体指示剂长时间保留在线粒体中，因为该指示剂带有细胞保留基团。这一关键特性显着提高了染色效率。它可以很容易地适用于各种荧光平台，如微孔板分析，免疫细胞化学和流式细胞术。它适用于增殖和非增殖细胞，可用于悬浮细胞和贴壁细胞。MitoLite 线粒体橙色荧光探针是AAT Bioquest研发的产品。

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MitoLite 染料的分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟至2小时

清洗细胞

在荧光显微镜下分析

操作步骤

1.准备线粒体染色溶液：

1.1解冻MitoLite 染料至室温。

1.2通过将20μL500X Mitolite 染料稀释到10 mL Hanks和20 mm Hepes缓冲液或缓冲液（HBSS）中，制备染料工作溶液。

注1：20μLMitolite 染料足以用于一个96孔板。 在<-15℃下分装并储存未使用的MitoLite 染料储备溶液。 保护它免受光照，避免反复冻融循环。

注2：荧光线粒体指示剂的浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1对于贴壁细胞：a.在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积的染料工作溶液（来自步骤1.2）。 b.将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。 c.用预热（37ºC）Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HBSS）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液）替换染料加载溶液或清洗（特别是对于＃22679）细胞。用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 d.使用配有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：将细胞以1000rpm离心5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热（37℃）生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，并加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或缓冲液替换染料加载溶液或洗涤（特别是对于＃22679）。（例如生长培养基浓度为1：1的缓冲液）。用HBSS或生长培养基填充细胞孔。使用配有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为粘附细胞染色（见步骤2.1）。

参考文献

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