Cell Navigator 线粒体标记试剂盒是一套荧光成像工具，用于标记细胞器细胞器，如膜，溶酶体，线粒体和细胞核等。活细胞线粒体的选择性标记为研究细胞事件提供了一种强有力的方法。这个特定的试剂盒旨在标记蓝色荧光的活细胞线粒体。该试剂盒使用专有染料，可根据线粒体膜电位梯度选择性累积在线粒体中。线粒体指示剂是一种疏水性化合物，可以很容易地渗透完整的活细胞，并在进入细胞后被困在线粒体中。该荧光线粒体指示剂长时间保留在线粒体中，因为该指示剂携带细胞保留组。这一关键特征显着提高了染色效率。它可以很容易地适用于各种荧光平台，如微孔板分析，免疫细胞化学和流式细胞术。它适用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒为所有重要组分提供了优化的细胞标记方案。它适用于增殖和非增殖细胞，可用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 线粒体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

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样品分析

1.准备线粒体染色溶液：

1.1将所有组件温度调至室温。

1.2通过将20μLMitolite Green（组分A）稀释到10mL活细胞染色缓冲液（组分B）中制备染料工作溶液。

注1：对于一个96孔板，20μL的500X Mitolite Green（组分A）就足够了。在≤-20ºC下等分并储存未使用的500X Mitolite Green。避光，避免反复冻融循环。

注2：荧光线粒体指示剂的浓度根据具体应用而变化。可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1对于粘附细胞：在96孔黑色墙壁/透明底板上或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积（例如对于96孔板为100μL，对于384孔板为25μL）的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液）替换染料上样溶液。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：以1000rpm离心细胞5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热（37℃）生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，并加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液）替换染料上样溶液。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为粘附细胞染色（见步骤2.1）。

图1.使用Cell Navigator™线粒体染色试剂盒染色的U2OS细胞图像* Costar黑色96孔板中的绿色荧光*

参考文献

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