Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 红色荧光 是一套荧光成像工具，用于标记亚细胞细胞器，如膜，溶酶体，线粒体，细胞核等。活细胞区的选择性标记为研究空间细胞事件提供了一种强大的方法和时间背景。

该特定试剂盒设计用于在Ex / Em =575/597nm处以大斯托克斯位移的红色荧光标记活细胞的溶酶体。该试剂盒使用专有的溶解性染料，可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。该指示剂中的溶质，是一种疏水性化合物，很容易渗透到完整的活细胞，并被保留在溶酶体内一段时间。进入溶酶体后，其荧光显著增强。这一关键特征显著降低了其染色背景，使其可用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒提供所有必要组件。 它适用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest研发的产品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒。 

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试验方案

1. 准备细胞
2. 添加染料工作溶液
3. 在37°C孵育30分钟至2小时
4. 在荧光显微镜下Ex / Em = 575 / 597nm处进行分析

注意：1）实验前，取出转染试剂进行室温冻结。

样品示例及使用方法

1.准备溶酶体染色溶液：

1.1  取出试剂盒中A、B组分，室温避光静置5-10min。

1.2  移取20μLLysoBrite Red（组分A），用10mL活细胞染色缓冲液（组分B）进行稀释，制备染料工作液。

注意：1) 20μL的500XLysoBrite Red （组分A）足够完成一个96孔板，根据要求分装并储存未使用的500XLysoBrite Red（组分A）,避免反复冻融。

        2)荧光溶酶体指示剂的浓度根据实际应用而改变，可以根据探针的渗透性对细胞类型、细胞或组织的染色条件进行调整。

2.细胞染色：

2.1对于贴壁细胞：

在96黑色/透明微孔板（100μL/孔/ 96孔板）或装有适当培养基内的培养皿的盖玻片上培养细胞，当细胞达到所需的汇合时，在96孔板或培养皿内加入等量的LysoBrite Red工作液，在37℃、5％CO₂条件下培养箱中孵育30分钟，用预温(37°C) Hanks和20 mM Hepes缓冲液(HBSS)或自配的缓冲液清洗细胞两次，用HBSS或生长培养基填充细胞孔，再使用配有TRITC过滤器组的荧光显微镜观察细胞，使之带红色荧光(Ex/Em = 575/600 nm)。

注意：1）如果细胞看起来没有充分染色，建议适当增加染料浓度或孵育时间。

2.2对于悬浮细胞：

向细胞中加入等量的LysoBrite Red工作液。在37℃、5％CO₂条件下培养箱中孵育30分钟，用预温(37°C) Hanks和20 mM Hepes缓冲液(HBSS)或自配的缓冲液清洗细胞两次，用HBSS或生长培养基填充细胞孔，再使用配有TRITC过滤器组的荧光显微镜观察细胞，使之带红色荧光(Ex/Em = 575/600 nm)。

注意:  1）如果细胞看起来没有充分染色，建议适当增加染料浓度或孵育时间。

         2）悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为贴壁细胞染色。

示例数据分析及图示

图一：在Costar黑色透明底96孔板中用Cell Navigator 溶酶体染色试剂盒染色Hela细胞的荧光成像结果。

图二：HeLa细胞分别用A和B，置于Costar黑壁/透明底96孔板中染色后的荧光成像结果，在0秒和120秒的曝光时间下，使用Olympus荧光显微镜对信号进行比较。A: Cell Navigator溶酶体染色试剂盒(Cat# 22658)、B: LysoTracker®Red DND-99(来自Invitrogen公司)。 A: Cell Navigator溶酶体染色试剂盒(Cat# 22659)、B: LysoTracker®Red DND-99(来自Invitrogen公司)。

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