活细胞染色 CytoTell 蓝色是美国AAT Bioquest生产的活细胞染色探针，流式细胞仪结合荧光染色是分析异质细胞群的有力工具。在所有现有的荧光染料中，CFSE是优选的细胞增殖指示剂，其广泛用于活细胞分析。然而，由于CFSE及其荧光素类似物的激发和发射光谱几乎与GFP或FITC相同，因此不可能将CFSE及其荧光素类似物用于GFP转染的细胞或用于使用FITC标记的抗体的应用。CytoTell™染料在405 nm，488 nm或633 nm等主要激光线上具有多色发光。CytoTell™染料具有小的细胞毒性，可用于GFP细胞系或FITC标记抗体的多色应用，因为它们具有不同于荧光素的激发或发射光谱。CytoTell™Blue是一种蓝色荧光染料，可均匀染色细胞。当细胞分裂时，染料在子细胞之间平均分布，可以测量为染料荧光强度的连续减半。用CytoTell TM Blue标记的细胞可以固定并透化，以使用标准的含甲醛固定剂和基于皂苷的透化缓冲液分析细胞内靶标。CytoTell™Blue具有405 nm的峰值激发，可以被紫色（405 nm）激光线激发。它具有450 nm的峰值发射，可以使用450/20带通滤光片（相当于PacificBlue®或BDHorizo​​n®V450）进行检测，使其与使用GFP或FITC抗体进行多色细胞分析的应用兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的活细胞染色 CytoTell 蓝色。 

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操作方法

1.准备500 XDMSO储备溶液

将500μLDMSO加入染料粉末小瓶中，通过涡旋混合均匀，得到500X DMSO储备溶液。

注意：应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在< -20 ^o C冷冻。避免反复冻融循环，避免光照。

2.准备1X染料工作溶液

制备1X 染料工作由d溶液iluting的500X DMSO储备溶液在1至500   在Hanks（HHBS）和20mM Hepes缓冲液或者您选择的缓冲液，pH 7 （如1种500X的μL DMSO储备溶液至500 μL缓冲区）使用前。通过涡旋将它们充分混合。

注意：染料工作溶液的终浓度应根据经验确定不同的细胞类型和/或实验条件。建议在至少在折叠范围内的浓度下进行测试。例如CytoTell™Red在某些细胞类型中使用的量可能比推荐浓度少得多。

3.用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：

3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间。

3.2离心细胞，每管取1-5×10 ^5个细胞。

3.3将细胞重悬于500μL 染料工作溶液中（来自步骤2）。

可选：一个可以添加500X DMSO储备溶液到细胞中的情况下直接介质除去（如，加入1种微升500X DMSO储备溶液加到500个微升细胞）

3.4在室温或37 ° C 下用染料溶液孵育细胞10到30分钟，避光。

3.5从细胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。将细胞重悬于500μL预热的HHBS或培养基中，每管获得1-5×10⁵个细胞。

3.6使用流式细胞仪或荧光显微镜监测推荐的Ex / Em（见表1）的荧光变化。

参考文献

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Authors: Volker Klöss
Journal: (2017)

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Interaction and Mutual Activation of Different Innate Immune Cells Is Necessary to Kill and Clear Hepatitis C Virus-Infected Cells
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Onionin A inhibits ovarian cancer progression by suppressing cancer cell proliferation and the protumour function of macrophages
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Multiplexing analysis of cell proliferation and cellular functions using a new multicolor panel of fluorescent cell proliferation dyes (P1290)
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