磷酸盐检测试剂 MESG 是美国AAT Bioquest生产的磷酸盐检测试剂，在无机磷酸盐存在下，MESG通过嘌呤核苷磷酸化酶（EC 2.4.2.1）转化为2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤，吸收波长变为红色。该特征已用于通过分光光度法定量磷酸盐。我们提供方便的MESG的磷酸盐检测试剂盒（＃21659）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的磷酸盐检测试剂 MESG 。

操作步骤

1.准备分析试剂：

1.1使用前在室温下解冻所有四种成分。

1.2准备 MESG 底物（组分 B）溶液：将 500 μL 的 ddH2O 添加到 MESG 底物（组分 B）的小瓶中。通过涡旋充分混合以获得 MESG 底物溶液

注意： 250μl足以使一个平板制成单独使用的等分试样并立即储存在-20°C。

1.3制备嘌呤核苷磷酸化酶（组分 C）溶液：将 100 μL ddH2O 添加到嘌呤核苷磷酸化酶（PNP；组分 C）的小瓶中。涡旋混匀，得到嘌呤核苷磷酸化酶溶液

1.4制备测定溶液：将全部体积的MESG底物溶液（来自步骤1.2）和嘌呤核苷磷酸化酶 溶液（来自步骤1.3）加入到测定缓冲液瓶（组分A）中，充分混合以得到测定溶液。将测定溶液置于冰上。

注1：该测定溶液在冰上稳定至少4小时。

注2：为达到理想的效果，需要紫外线透明板或比色皿。

注3：由于该测定对P i 的高灵敏度，使用无P i的实验室器皿非常重要

2. 准备连续稀释的磷酸盐标准品和/或测试样品：

2.1制备磷酸盐标准品： 将50μL1mMKH ₂ PO ₄（组分D）加入950μL去离子水或酶反应缓冲液中，得到50μM磷酸盐标准溶液。

2.250μM磷酸盐标准溶液200μL1：2系列稀释，得到25，12.5，6.25，3.125，1.56和0.78μM连续稀释的磷酸盐标准。

2.3根据表1和2，将含磷酸盐的测试样品和/或磷酸盐标准品加入透明的UV透明96孔微孔板中。

表1透明的UV透明96孔板中磷酸盐标准品和测试样品的方案

注意：PS =磷酸盐标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2每个孔的试剂组成

注意：将磷酸盐标准品的连续稀释液（0.1μM至50μM）加入PS1至PS7的孔中。

3.运行PhosphoWorks MESG磷酸盐测定：

3.1添加50μL/孔的测定溶液（来自S对 TEP 1.4） 中到的磷酸盐标准，空白对照和测试样品的孔中。彻底混合试剂。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL分析溶液。

3.2在室温下孵育30分钟。用酶标仪或分光光度计在360nm处监测吸光度。

注意：对于需要总体积大于100μL的比色皿测定，在测量吸收之前按比例增加样品和测定试剂的体积。

参考文献

Sacrificial crystal templating of hyaluronic acid-based hydrogels
Authors: Richelle C Thomas, Paul E Chung, Shan P Modi, John G Hardy, Christine E Schmidt
Journal: European Polymer Journal (2016)

Osteogenic cell cultures cannot utilize exogenous sources of synthetic polyphosphate for mineralization
Authors: Marianne B Ariganello, Sidney Omelon, Fabio Variola, Rima M Wazen, Pierre Moffatt, Antonio Nanci
Journal: Journal of cellular biochemistry (2014): 2089–2102