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产品参数

产品概述

ReadiLink BSA偶联试剂盒 是美国AAT Bioquest生产的牛血清蛋白偶联试剂盒，牛血清白蛋白（BSA）是一种血清白蛋白，具有许多生物化学应用，包括ELISA（酶联免疫吸附测定），免疫印迹和免疫组织化学。像大多数丰富的血浆蛋白一样，它非常稳定和可溶。此外，67kDa蛋白质足够大且复杂至完全免疫原性。它含有每个分子的多个位点，用于使用胺反应性或羧基反应性交联剂有效缀合肽和其他抗原。因此，BSA是一种流行的载体蛋白，用于缀合半抗原和其他弱抗原，使其对抗体产生具有更高的免疫原性。这种ReadiLink™BSA共轭试剂盒主要用于简单制备用于免疫和抗体生产的半抗原载体结合物。 ReadiLink™BSA缀合试剂盒使用羧基反应性碳二亚胺作为交联剂，将半抗原与载体蛋白一步结合。所得的缀合物用于引发针对半抗原的免疫应答和抗体产生。羧基反应性碳二亚胺与肽和蛋白质上暴露的羧基和氨基反应形成稳定的键。这些试剂盒含有BSA，配制成与羧基反应性碳二亚胺反应相容的缓冲液和脱盐旋转柱，通过简单的离心步骤提供出色的蛋白质回收。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的ReadiLink BSA偶联试剂盒 。 

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备蛋白质溶液
2.准备半抗原解决方案
3.将蛋白质与半抗原混合到EDC中
4.在室温下孵育反应2小时
5.通过脱盐来纯化缀合物

 

操作步骤

1.准备BSA-Hepten共轭：

1.1将200μLDdH2 O加入到BSA（组分A）的小瓶中以制备10mg / mL溶液。

1.2在450μL缀合缓冲液（组分B）中溶解最多2mg半抗原。注意：一些半抗原可能具有有限的溶解度，使用DMSO（在最终的缀合溶液中<30％）首先溶解它。较高浓度的DMSO可能使载体蛋白不可逆地变性。

1.3将450μL半抗原溶液加入200μLBSA溶液中，得到Hapten-BSA混合溶液。

1.4将Hapten-BSA溶液加入一小瓶EDC（10mg）（组分C）中，通过温和混合溶解。在室温下孵育2小时。

1.5通过脱盐纯化缀合物以除去未反应的交联剂和蛋白质防腐剂（例如叠氮化钠）。

2.纯化BSA-Hepten结合物：

2.1使用前将1瓶纯化缓冲液（组分D）解冻至室温。未使用的缓冲液可以在4°C下储存1周。

2.2拧下脱盐柱（组件E）的底部盖子并松开盖子。将色谱柱放入收集管中。

2.3将柱以1,000g离心2分钟以除去储存溶液。

2.4取下盖子，慢慢地向柱子中加入1 mL纯化缓冲液。以1,000g离心2分钟，取出缓冲液。再重复此步骤3次，从收集管中丢弃缓冲液。

2.5将色谱柱放入新的收集管中，轻轻地将样品放入紧凑树脂床的中心。

2.6将柱以1,000g离心2分钟以收集样品。

2.7现在可以将Hapten-BSA缀合物用于免疫。如果要将Hapten-BSA缀合物储存超过几天，则对缀合物进行无菌过滤，并在4°C或-20°C下储存。注意：如果在一周内使用缀合物，可以使用PBS进行纯化。如果要冷冻缀合物，使用纯化缓冲盐（组分D）进行纯化。如果在缀合中使用DMSO，则制备具有相同百分比的用于缀合的DMSO的纯化缓冲盐。这将使脱盐期间塔中的沉淀最小化。如果在缀合过程中形成沉淀，则将沉淀的材料离心，收集上清液并保存沉淀物。净化上清液。将沉淀物与纯化的缀合物合并。

 

数据分析

图1.EDC与载体蛋白BSA或KLH（由红球代表）的羧基反应，形成胺反应性O-酰基异脲中间体（中心分子）。 O-酰基异脲中间体与由较小的蓝色球代表的抗原分子上的胺基反应，产生通过稳定的酰胺键连接的两个分子的缀合物[请注意O-酰基异脲中间体也易于水解]。

 

参考文献

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产品名称	货号
ReadiLink KLH偶联试剂盒	Cat#5502