Buccutite PE-Cy5.5 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。PE-Cy5.5是流式细胞术中常用的颜色。其主要吸收峰位于565nm，发射峰位于~700nm。对于这种串联颜色，推荐使用682/33 nm和695/40 nm的滤光片组。 AAT Bioquest提供这种Buccutite 快速标记试剂盒，以促进PE-Cy5.5与抗体和其他蛋白质（如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂）的串联结合。 Buccutite PE-Cy5.5共轭试剂盒为您的抗体与PE结合提供了一种强大而方便的方法。该试剂盒包括活化的PE和反应缓冲液。缀合的抗体可用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2次标记反应，每次反应多100μg抗体。考虑到PE的大尺寸（240kDa），标记反应中使用的抗体量必须始终小于RPE的量。任何新抗体试剂的佳比例必须通过实验确定，但每100ug RPE 50-60ug IgG抗体通常可获得结果。我们的试剂盒提供预活化的PE-Cy5.5，以促进PE-Cy5.5串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。我们的预活化PE-Cy5.5串联已准备好结合，产生比常规繁琐的基于SMCC的缀合化学高得多的产率。此外，我们的预活化PE-Cy5.5串联通过其蛋白质中丰富的氨基与蛋白质缀合，而SMCC化学靶向必须通过抗体还原而再生的硫醇基团。Buccutite PE-Cy5.5抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

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实验方案

操作步骤

1.运行Antibody-Buccutite MTA反应

1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。

2.制备抗体-PE-Cy5.5缀合物

2.1通过向Buccutite FOL活化的PE-Cy5.5（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

2.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE-Cy5.5溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。

2.3抗体-PE-Cy5.5结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-PE-Cy5.5结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。

3.抗体-PE-Cy5.5共轭物的储存

抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-PE-Cy5.5缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-PE-Cy5.5缀合物冻干并在≤-20℃下储存。

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