Buccutite RPE 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。R-藻红蛋白（PE）是一种橙色荧光蛋白，其激发波长为565 nm，发射波长为575 nm。AAT Bioquest提供此Buccutite 快速标记试剂盒，以促进PE与抗体和其他蛋白质（例如链霉亲和素和其他辅助试剂）的结合。Buccutite PE偶联试剂盒提供了一种强大而便捷的方法来将抗体与PE偶联。该试剂盒包括预活化的PE和反应缓冲液。整个过程仅需要两次简单的混合，而无需进一步纯化。结合的抗体可以用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2个标记反应，每个标记反应多25 ug。考虑到PE的大尺寸（240 kDa），标记反应中使用的抗体量必须始终小于PE的量。任何新抗体试剂的配比必须通过实验确定，但是每50 ug PE中通常使用25 ug IgG抗体可获得结果。我们的试剂盒提供了预活化的PE，以促进PE与抗体和其他蛋白质（例如链霉亲和素和其他辅助试剂）的结合。我们的预活化PE已准备好进行共轭，比传统繁琐的基于SMCC的共轭化学具有更高的产率。此外，我们的预活化PE通过其在蛋白质中含量丰富的氨基与蛋白质偶联，而SMCC化学的目标是必须通过还原抗体来再生的巯基。Buccutite RPE抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

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实验方案

操作步骤

1.运行Antibody-Buccutite MTA反应

1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。

2.制备抗体-PE缀合物

4.1通过向Buccutite FOL活化的PE（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

4.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。

4.3抗体-PE结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-PE结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。

3.抗体-PE共轭物的储存

抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-PE缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-PE缀合物冻干并在≤-20℃下储存。

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