Amplite 荧光法辅酶A定量试剂盒 绿色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测辅酶A的试剂盒，辅酶A（CoA）是所有形式的细胞生命中的通用和必需的辅因子，在许多生物合成，能量产生和降解途径中充当主要的酰基载体。它在脂肪酸，丙酮酸氧化和柠檬酸循环的合成和氧化中起重要作用。 CoA的测量是研究许多生物系统中的生物过程和事件的基本任务之一。有一些试剂或检测试剂盒可用于定量生物系统中的CoA含量。现有的商业套件要么缺乏灵敏度，要么程序繁琐。我们的Amplite 荧光CoA 定量分析试剂盒提供超灵敏荧光测定法，通过检测CoA中的-SH基团来定量CoA含量。我们在该试剂盒中使用的专有荧光CoA Green 染料在与-SH反应后变为强荧光。该测定试剂盒可在100μL测定体积（40nM）中检测少至4皮摩尔的CoA。它可以在方便的96孔或384孔微量滴定板格式下以Ex / Em = 490 / 520nm进行，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法辅酶A定量试剂盒。 

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96孔板检测示例

概述

准备CoA测定混合物（50μL）

添加CoA标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10分钟 –  1小时

监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分

操作步骤

1.准备CoA标准库存解决方案：

将200μlddH2O加入CoA标准小瓶（组分C）中以制备1mM（1nmol / L）储备溶液。

注意1：强烈建议使用已用氮气喷射的ddH2O去除氧气，以制备辅酶A原液。

注意2：水溶液不稳定，会迅速降解。 应储存在2-8℃，并在1天内使用。

2.准备100X CoA Green 原液：

将100μLDMSO（组分D）加入到小瓶CoA Green （组分A）中以制备100X储备溶液。

注意：未使用的CoA Green 原液应分成一次性使用的等分试样，保存在-20℃并避光。

3.准备CoA Assay混合物：

将50L 100X CoA Green 储备溶液（来自步骤2）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。

4.准备CoA标准品的连续稀释液（0至30μM）：

4.1将30μLCoA标准储备溶液（来自步骤1）加入970L测定缓冲液（组分B）中以产生30μM（30pmol / L）CoA标准品。

注意：稀释的CoA标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

4.2取200μL30μMCoA标准溶液，用Assay缓冲液（组分B）进行1：3连续稀释，得到10,3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释的CoA标准品。

4.3将CoA标准品和含CoA的测试样品加入到实心黑色96孔微孔板中，如说明书中的表1和2所示。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

5.运行CoA测定：

5.1将50μLCoA反应混合物（来自步骤3.1）添加至CoA标准品的每个孔，空白对照和测试样品（参见步骤4.3），以使总CoA测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLCoA反应混合物。

5.2在室温下孵育反应10分钟至1小时，避光。

5.3用荧光板读数器监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光增加。

参考文献

Methods for measuring CoA and CoA derivatives in biological samples
Authors: Yugo Tsuchiya, Uyen Pham, Ivan Gout
Journal: Biochemical Society Transactions (2014): 1107–1111