200 Tests

产品参数

产品概述

Amplite 荧光法丙三醇检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙三醇的试剂盒，甘油是合成肝脏和脂肪组织中甘油三酯和磷脂的前体。禁食时，储存在这些脂滴中的甘油三酯可被水解以产生游离甘油和脂肪酸。 释放到血流中的游离甘油的量与甘油三酯/脂肪酸循环速率成正比，甘油三酯/脂肪酸循环速率在代谢调节和热量产生中是重要的。 Amplite 荧光甘油测定试剂盒提供了一种灵敏的基于荧光的测定方法，用于测量生物样品中的甘油水平。 该测定基于甘油的酶偶联反应，其中产物过氧化氢可以在HRP偶联反应中使用我们的Amplite HRP底物检测。 荧光信号可以通过Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光酶标仪进行测量。 使用此荧光甘油测定试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测到低至0.015 mg / L（〜0.16μM）的甘油。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法丙三醇检测试剂盒。 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备甘油工作溶液（50 µL）
2.加入甘油标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光增加

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite HRP底物储备液（200X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到Amplite HRP底物（组分A）的小瓶中，制成200X Amplite HRP底物原液,避光。

1.2 甘油标准溶液（1 mg / mL）：
将1 mL ddH₂O或1x PBS缓冲液添加到小瓶甘油标准溶液（组分D）中，制成1 mg / mL甘油标准溶液。

 

2.标准溶液

甘油标准
将10μL的1 mg / mL甘油标准溶液添加到990μL的1x PBS缓冲液中，以生成10μg/ mL的甘油标准溶液（GS7）。取10 µg / mL甘油标准溶液（GS7），并在1x PBS缓冲液中进行1：3系列稀释，以得到系列稀释的甘油标准液（GS6-GS1）。

 

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合物（组分B）中，并混合均匀。

3.2 将25 µL 200X Amplite HRP底物原液添加到组分B + C的瓶子中，并充分混合以制成甘油工作液。 注意：这种甘油工作溶液足以用于一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

 

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中甘油标准品和测试样品的布局。 GS =甘油标准品（GS1-GS7，0.01至10 µg / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
GS1	GS1	…	…
GS2	GS2	…	…
GS3	GS3
GS4	GS4
GS5	GS5
GS6	GS6
GS7	GS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
GS1-GS7	50ul	连续稀释（0.01至10 µg / mL）
BL	50ul	1X PBS缓冲液
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局，准备甘油标准品（GS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.在甘油标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL甘油工作溶液，以使甘油总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请在每个孔中添加25 µL甘油工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。

4.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）处监视荧光的增加。

 

参考文献

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