Amplite 比色法L-天门冬氨酸（天冬氨酸）检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测天门冬氨酸的试剂盒，天冬氨酸（或天冬氨酸）是带负电荷的极性氨基酸。 天冬氨酸参与嘧啶生物合成的控制点，转氨反应，与天冬酰胺的相互转化，在尿素循环中导致AMP的代谢途径中，并且是高丝氨酸，苏氨酸，异亮氨酸和甲硫氨酸的前体。 它也参与苹果酸天冬氨酸穿梭。 Amplite 比色天冬氨酸测定试剂盒为生物样品中天冬氨酸的定量分析提供了灵敏的比色测定。 天冬氨酸转化为丙酮酸，通过酶偶联反应产生过氧化氢。 天冬氨酸产生的过氧化氢的量用Amplite Red底物监测，用于通过在575nm处的吸光度酶标仪来定量天冬氨酸。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法L-天门冬氨酸（天冬氨酸）检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品（50 µL）以及连续稀释的天冬氨酸标准品（50 µL）
2.加入等体积的工作溶液（50 µL）
3.在37°C下孵育20-30分钟
4.监测吸光度在575±5 nm处的增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 天冬氨酸标准溶液（10 mM）：
将100 µL ddH₂O加入天冬氨酸标准样品瓶（组分E）中，制成10 mM天冬氨酸标准溶液。

1.2 Amplite Red底物储备液：
向Amplite Red底物（组分A）中加入50 µL DMSO（组分F），制成200X Amplite Red底物原液。

2.标准溶液

天冬氨酸标准
向990 µL 1X PBS缓冲液中加入10 µL 10 mM天冬氨酸标准液，得到100 µM天冬氨酸溶液（ASP7）。 然后在1X PBS缓冲液中进行1：2的系列稀释，以得到系列稀释的天冬氨酸标准品（ASP6-ASP1）。

3.工作溶液

3.1 Conversion Mix（100X）：
将50 µL ddH2O加入转化混合液（组分D）中，制成100X转化混合液。

3.2 Amplite Red：
将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合1瓶（组分B1）中，并充分混合。 将100μLddH₂O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中，并充分混合。 将整个小瓶（100μL）的酶混合液2、25μL的200X Amplite Red底物储备液和50μL的100X Conversion Mix溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中并充分混合。 注意：工作溶液不稳定，请立即使用，并避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.在透明的底部96孔微孔板中的天冬氨酸标准品和测试样品的布局。 ASP =天冬氨酸标准品（ASP1-ASP7，1.56至100 µM），BL =空白对照（1×PBS缓冲液），TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局准备天冬氨酸标准品（ASP），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.向天冬氨酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL Amplite Red工作溶液，以使天冬氨酸总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，向每个孔中加入25 µL Amplite Red工作溶液，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下进行天冬氨酸测定。

3.将反应混合物在37°C孵育20-30分钟。

4.用吸光度板读数器监测荧光的增加，并在575 nm的OD处进行路径检查。

参考文献

Perspective approaches with the use of biocatalysts for improving the processes of polyaspartic acid production from oil benzene fraction after oxidative desulfurization
Authors: O Maslova, O Senko, N Stepanov, E Efremenko
Journal: (2019): 012037

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