200 Tests

产品参数

产品概述

Amplite 荧光法L-乳酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测乳酸的试剂盒，乳酸具有两种光学异构体： L-乳酸和D-乳酸。乳酸是不断从丙酮酸通过酶乳酸脱氢酶（LDH ）的代谢和运动的过程产生的。研究细胞和动物生理学的时候是非常有用的。 D-乳酸是不被哺乳动物代谢，其从体内主要依赖于肾排泄。 D-和L -乳酸被发现在许多发酵乳产品，如酸奶和奶酪，以及在泡菜和腌制肉类和鱼类。D-和L -乳酸（由产生的）是食品，如鸡蛋，牛奶，果汁和酒的品质指标。异常高浓度的D-乳酸在血液中通常是过度生长在胃肠道中的反映。 AAT Bioquest的Amplite 乳酸检测试剂盒（目录号13814和13815对L -乳酸检测，和Cat ＃ 13810和13811的D-乳酸检测），用于检测L-乳酸或D -乳酸同时提供荧光和吸光度为基础的方法生物样品如血清，血浆，以及细胞培养物的样品。该信号可通过荧光酶标仪在EX/ EM = 540 nm/590 nm处读取。我们能够检测1.4uM的L-乳酸在100微升反应体积中。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法L-乳酸检测试剂盒。 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

96孔板测定示例

概述

制备D-乳酸测定混合物（50μL）

加入D-乳酸标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

 

操作方法

1.准备NAD储备溶液（100X）：

向NAD小瓶（组分C）中加入100μLH2O，制成100X NAD储备溶液。

 

2.准备D-乳酸储备液：

将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入到D-乳酸盐标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：未使用的D-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

3.准备D-乳酸标准品（0至1 mM）的连续稀释液：

3.1将10μLD-乳酸储备溶液（来自步骤2）加入990L 1x PBS缓冲液中以产生1mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：稀释的D-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1mM D-乳酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0μM的D-乳酸标准品系列稀释液。

3.3如说明书中的表1和2中所述，将含有D-乳酸盐标准品和含D-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微量培养板中。

 

4.准备D-乳酸测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

4.2将50μLNAD储备液（100X，来自步骤1）加入组分A（来自步骤4.1）的瓶中，并且混合均匀。

注意：这种D-乳酸测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的D-乳酸测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

5.运行D-乳酸测定：

5.1将50μLD-乳酸测定混合物（来自步骤4.2）添加到D-乳酸标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3.3）的每个孔中，以使总D-乳酸测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLD-乳酸测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度读板仪检测吸光度比率的增加。

 

参考文献

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