蛋白酶荧光底物Z-Gly-Pro-AMC是美国AAT Bioquest生产的用于Caspase的试剂，Z-Gly-Pro-AMC是用于测定脯氨酸后裂解酶（脯氨酰内肽酶）的荧光底物。 该底物被脯氨酰内肽酶水解，产生高度荧光的7-酰氨基-4-甲基香豆素（AMC）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的蛋白酶荧光底物Z-Gly-Pro-AMC。 

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样品操作及分析

以下协议仅提供指导，应根据您的特定需求进行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常规解决方案胱天蛋白酶测定

1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。

2.如下准备2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。

3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合，并在室温下孵育至少1小时。

4.使用荧光酶标仪监测荧光，或使用酶标仪监测吸光度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针的细胞Caspase测定

1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。

2.根据需要处理细胞。

3.通过用20 mM Hepes缓冲液（HHBS）在Hanks中稀释DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X渗透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。

4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合（来自步骤2.3），并在37°C，5％CO2的培养箱中孵育细胞至少1小时。

5.用HHBS清洗细胞至少一次。

6.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定（仅适用于＃13470-13476）

1.通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。

2.根据需要处理细胞。

3.以1：250的比例将250 X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中（例如2 µL至500 µL细胞），并将细胞在37°C，5％CO2的培养箱中孵育1小时。

4.用HHBS清洗细胞至少一次。

5.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

参考文献

Antiplasmin-cleaving enzyme is a soluble form of fibroblast activation protein
Authors: Lee KN, Jackson KW, Christiansen VJ, Lee CS, Chun JG, McKee PA.
Journal: Blood (2006): 1397

Substrate-dependent, non-hyperbolic kinetics of pig brain prolyl oligopeptidase and its tight binding inhibition by JTP-4819
Authors: Venalainen JI, Juvonen RO, Forsberg MM, Garcia-Horsman A, Poso A, Wallen EA, Gynther J, Mannisto PT.
Journal: Biochem Pharmacol (2002): 463