Amplite 荧光法蛋白酶体20S活性检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的蛋白酶检测试剂盒，蛋白酶体的主要功能是通过蛋白水解（一种破坏肽键的化学反应）降解不需要的或受损的蛋白质。蛋白酶体降解途径对于许多细胞过程是必不可少的，包括细胞周期，基因表达的调节和对氧化应激的反应。该途径中常见的蛋白酶体形式是蛋白酶体26S，一种ATP依赖性蛋白水解复合物，其含有一个20S（700-kDa）核心颗粒结构和两个19S（700-kDa）调节帽。20S核心包含三种主要的蛋白水解活性，包括胰凝乳蛋白酶样，胰蛋白酶样和半胱天冬酶样活性。它负责细胞凋亡，DNA修复，内吞作用和细胞周期控制所涉及的关键蛋白的分解。

我们的Amplite 荧光蛋白酶体20S分析试剂盒是一种均相荧光分析，可测量与培养细胞中蛋白酶体复合物相关的胰凝乳蛋白酶样蛋白酶活性。该试剂盒使用LLVY-R110作为蛋白酶体活性的荧光指示剂。 蛋白酶体对LLVY-R110的切割产生强绿色荧光R110，其在520-530nm下荧光监测，激发波长为480-500nm。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。该测定是稳定的，并且容易适用于高通量测定以评估蛋白酶体活性或筛选培养细胞或溶液中的抑制剂。可以以方便的96孔和384孔荧光微量滴定板形式进行测定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法蛋白酶体20S活性检测试剂盒。 

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适用仪器

检测方案

概述

用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

制备细胞加入等体积的蛋白酶体测定溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

在37°C或室温下孵育至少1小时

检测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

溶液配制

储备溶液配制

蛋白酶体 LLVY-R110 底物原液 (400X)

将 25 µL DMSO（组分 C）添加到 Proteasome LLVY-R110 底物（组分 A）小瓶中，并充分混合以制备 400X Proteasome LLVY-R110 底物原液。

工作溶液配制

将 25 μL 400X Proteasome LLVY-R110 底物储备液添加到 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，并充分混合，制成蛋白酶体工作溶液。注意：此蛋白酶体工作溶液足以用于 1 个板。避光。

操作方案

1.用 PBS 或所需缓冲液中的 10 µL 10X 测试化合物（对于 96 孔板）或 5 µL 5X 测试化合物（对于 384 孔板）处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在 5% CO2、37°C​​ 培养箱中孵育所需的时间。注：纯蛋白酶体或细胞裂解物可直接用于筛选蛋白酶体抑制剂。

3.添加 100 µL/孔（96 孔板）或 25 µL/孔（384 孔板）蛋白酶体工作溶液。

4.将板在 37°C 避光孵育至少 1 小时（2 小时至过夜）。注意：每个细胞系应单独评估以确定最佳孵育时间。

5.检测 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff = 515 nm）处的荧光强度（顶部读数）。

参考文献

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