500 Tests

产品参数

产品概述

Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸酶的试剂盒，碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA 或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端，并生成一分子的有机基团和一分子的无机磷酸。碱性磷酸酶不是单一的酶，而是一组同功酶。碱性磷酸酶在ELISA、免疫组化，Northern, Southern 和 Western blot分析中有很高的灵敏度。它广泛地用于多种生物学分析（特别是免疫分析）和基于ELISA的疾病诊断。Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 *绿色荧光* 用FDP，一种灵敏的碱性磷酸酶绿色荧光底物来定量检测溶液中、细胞抽提液，固相物质表面（例如PVDF膜）的碱性磷酸酶活性。本试剂盒提供所有必需组分，包括我们佳的产品组合和分析方法，并且与可用于HTS（高通量筛选）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒。 

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适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	490nm
Em:	525nm
Cutoff:	515nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加碱性磷酸酶标准品或测试样品（50μL）
3.在室温或37°C孵育10 – 30分钟
4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光强度（Cutfoff = 515 nm）

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 FDP（250X）：
将100μLDMSO（组分D）加入到FDP小瓶（组分A）中以制备250X FDF储备溶液。 应立即使用FDP储备溶液。

1.2 碱性磷酸酶标准溶液（100 U / mL）：
将100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水加入碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位）中，得到100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。 注意：碱性磷酸酶标准溶液不稳定。

 

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 取1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液，进行1:10（AS7），然后在H2O-0.1％BSA中进行1：3连续稀释，得到碱性磷酸酶标准品（AS6-AS1）的连续稀释液。

 

3.工作溶液

将20μL250XFDP储备溶液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中并充分混合以制备碱性磷酸酶工作溶液。 注意：避光。

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样品操作及分析

表1.碱性磷酸酶标准品和实心黑色96孔微孔板中的测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.1至100 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	…	…
AS2	AS2	…	…
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（0.1至100 mU / mL）
BL	50ul	H2O – 0.1% BSA
TS	50ul	测试样本

1.在上清液中进行碱性磷酸酶测定：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。注意：根据需要准备细胞或组织样本。应丢弃未使用的碱性磷酸酶标准品系列稀释液。

1.2向碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL碱性磷酸酶工作溶液，使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL碱性磷酸酶工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟，避光。可选：在30分钟孵育结束时，加入50μL/孔（对于96孔板）或25μL/孔（对于384孔板）的终止溶液（组分E）。

1.4用荧光板读数器在激发= 490±10，发射= 525±10nm（截止= 515nm）监测荧光增加。

 

2.在细胞中运行碱性磷酸酶测定：

2.1根据需要处理细胞。

2.2从细胞板中完全除去生长培养基。 注意：由于生长培养基与FDP的干扰，重要的是从细胞板中完全除去生长培养基。

2.3用5mL蒸馏水将1mL稀释的5mL碱性磷酸酶工作溶液稀释。

2.4向细胞孔中加入100μL（对于96孔板）或50μL（对于384孔板）1：1稀释的碱性磷酸酶工作溶液。

2.5将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。 可选：在30分钟孵育结束时加入50μL/孔（对于96孔板）或25μL/孔（对于384孔板）的终止溶液（组分E）。

2.6用荧光板读数器在激发= 490±10，发射= 525±10nm（截止= 515nm）监测荧光增加。

 

参考文献

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