Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光价格 2111
产品规格

500 Tests

产品货号

Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
存储条件
产品概述

Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒,碱性磷酸酶是用于ELISA,免疫组织化学,Northern,Southern和Western印迹应用的高度灵敏的酶。 它广泛用于各种生物测定(特别是免疫测定)和基于ELISA的诊断。 这种Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒使用pNPP(一种生色磷酸酶底物)来定量溶液,细胞提取物以及固体表面(如PVDF膜)上的碱性磷酸酶活性。 该试剂盒通过我们优化的“混合和读取”测定方案提供所有必需组分,该方案与HTS液体处理仪器兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 400nm
推荐孔板: 透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶标准品和/或测试样品(50μL)
2.添加ALP工作溶液(50μL)
3.在室温或37°C孵育10 – 30分钟
4.监测400nm处的吸光度增加

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 pNPP储备液(100X):
将300μL蒸馏水加入pNPP小瓶(组分A)中。 好好混合。 应立即使用pNPP储备溶液。 注意:如果妥善保存,解决方案应该有效期为3-4周。

1.2 碱性磷酸盐标准溶液:
添加100μL含0.1%BSA(H2O-0.1%BSA)的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品(组分C,10单位),以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。

 

2.标准溶液

碱性磷酸盐标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1%BSA中,生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 然后取100μL的1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液进行1:10稀释,得到100 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液(AS7)。 然后进行1:3连续稀释以获得剩余标准品(AS6-AS1)。 注意:应丢弃未使用的稀释碱性磷酸酶标准溶液部分。

 

3.工作溶液

将50μLpNPP储备溶液(100X)加入5mL测定缓冲液(组分B)中,使总体积为5.05mL的pNPP工作溶液。

 

样品操作及分析

表1.碱性磷酸酶标准品和白色/透明底96孔微孔板中的样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品(AS1-AS7,0.1至100 mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品

BL BL TS TS
AS1 AS1
AS2 AS2
AS3 AS3    
AS4 AS4    
AS5 AS5    
AS6 AS6    
AS7 AS7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AS1-AS7 50ul 连续稀释(0.1至100 mU / mL)
BL 50ul H2O-0.1%BSA
TS 50ul 测试样品

1.在上清液中:

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸盐标准品(AS),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸盐标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLpNPP工作溶液,使总碱性磷酸盐测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLpNPP工作溶液,总体积为50μL/孔。

1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟,避光。

1.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

 

2.在细胞中:

2.1根据需要处理细胞。

2.2将等体积的pNPP工作溶液加入每个细胞孔(例如100μL/ 96孔板或50μL/ 384孔板)中。 注意:或者,从细胞板中取出生长培养基,用5 mL蒸馏水稀释5 mL工作溶液。 然后向细胞孔中加入100μL(对于96孔板)或50μL(对于384孔板)1:1稀释的工作溶液。

2.3将反应在所需温度下孵育30至60分钟,避光。

2.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

 

参考文献

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