Amplite 荧光法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的谷氨酸检测的试剂盒，XO（黄嘌呤氧化酶）是一种能催化次黄嘌呤到黄嘌呤或者更进一步催化黄嘌呤到尿酸的酶。在嘌呤的分解代谢扮演着重要角色。XO通常能在肝脏或者空肠检测到。在重度肝损伤，XO释放到血液中，因此血液中XO检测试验可以用来确定肝脏损伤的发生。黄嘌呤尿是一种少见遗传病，缺少XO导致血中高浓度黄嘌呤引起肾衰竭等健康疾病。Amplite XO检测试剂盒提供了一种快速超敏感的方法，来检测XO的活性。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。在实验分析种，XO氧化嘌呤碱基，次黄嘌呤、黄嘌呤转变成尿酸或者超氧化物，后者又自发的降解为双氧水。该试剂盒使用我们的Amplite Red底物使其成为双记录模式。红色的荧光信号很容易的通过荧光酶标仪（540／590nm）检测到或者被酶标仪（576nm）检测。Amplite黄嘌呤氧化酶检测试剂盒在100 ul检测体积中能检测到0.15mU／ml的XO。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒。 

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适用仪器

96孔板测定示例

概述

SOD标准品或测试样品（50μL）

添加SOD测定混合物（25μL）

添加酶反应混合物（25μL）

在室温下孵育10-30分钟读取560 nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，将所有试剂盒组分解冻至室温。

操作方法

1.Parepare系列SOD（0至100 U / mL）标准溶液：

1.1将50μL测定缓冲液（组分E）加入到SOD标准品（组分D）的小瓶中以制备10kU / mL SOD储备溶液。

注意：未使用的SOD溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

1.2在990μL分析缓冲液（组分E）中加入10μL10kU / mL SOD溶液，得到100 U / mL SOD溶液。取100μL的100 U / mL SOD溶液进行1:10连续稀释，然后进行1：3稀释，得到10,3,1,0.3,0.1,0.03 U / mL SOD标准溶液。

1.3如说明书中表1和2所述，将SOD标准品和含SOD的测试样品添加到96孔白壁/透明底或透明微孔板中。

2.Parepare SOD测定混合物1：

2.1将2.5 mL测定缓冲液（组分E）加入ReadiView SOD560（组分A）瓶中，充分混合。

2.2将50μL50X黄嘌呤（组分B）加入组分A（来自步骤2.1）的瓶中以制备SOD测定混合物。

注意：SOD测定混合物应在实验前准备好，避光。 测定混合物不稳定，应丢弃未使用的部分。

3.Parepare SOD测定混合物2：

3.1将50μL测定缓冲液加入到黄嘌呤氧化酶（组分C）的小瓶中，并将50μL黄嘌呤氧化酶原液转移到2.5mL测定缓冲液（组分E）中以制备SOD测定混合物2，充分混合。

3.1将25μLSOD测定混合物1（来自步骤2.2）添加到SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤1，说明书表1和2）。

3.2将25μLSOD测定混合物2（来自步骤3）加入SOD标准品，空白对照和测试样品（来自步骤4.1）的每个孔中。

注意：对于384孔板，将25μL样品，12.5μLSOD测定混合物1和12.5μLSOD测定混合物2加入每个孔中。

3.3在室温下孵育30-60分钟。

3.4监测550至560nm的吸光度强度。

参考文献

Intercomparative investigation of the total phenols, total flavonoids, In vitro and In vivo antioxidant activities of capparis Cartilaginea (Decne.) maire and weiller and Capparis Ovata Desf. from Jordan
Authors: Mahmoud A Al-Qudah, Safwan M Obeidat, Riyadh Muhaidat, Bahaa Al-Trad, Hala I Al-Jaber, Jamil N Lahham
Journal: Pharmacognosy Magazine (2018): 154

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