腺病毒定量——Cell BioLabs腺病毒快速定量试剂盒

通过对腺病毒基因组的改造,腺病毒载体是继逆转录病毒载体后被广泛应用的转基因载体,现已发展到第三代,转染效率高,且相对制备容易。从最早的腺病毒载体出现至今,腺病毒载体的包装系统已经经历了一系列的改进。腺病毒载体已经被广泛应用于动物细胞的基因转染和基因治疗等。

在腺病毒的应用过程中,我们经常需要测量病毒液的病毒含量以及腺病毒滴度。目前实验里做腺病毒常规滴度检腺病毒定量——Cell BioLabs腺病毒快速定量试剂盒测有通过TCID50或者空斑计数法(PFU)测量腺病毒感染滴度的方法,但是这种传统的方法实验周期较长,操作繁琐。如常规PFU的检测就就需要10天左右的时间。Cell BioLabs的QuickTiter™腺病毒功能滴定试剂盒,采用免疫蛋白反应的原理检测腺病毒标志性外壳蛋白——Hexon的表达含量,从而得到腺病毒液的功能滴度,只需2天多的时间就能获得比常规实验所需要10天的测量结果还要准确的数据。但是即使是这样的方法,也需耗时2天,一般说来,如果已经获得了纯化的病毒液,通过测量OD260来估算病毒颗粒的总含量不失为一种快捷的多的腺病毒定量方案。

上海金畔生物科技有限公司针对腺病毒定量为您推荐美国细胞生物学专业产品制造商Cell BioLabs的QuickTiter™ Adenovirus Rapid Quantitation Kit(目录号:VPK-106)。该试剂盒的工作原理如右图所示,首先使用核酸酶将病毒悬液内的核算分子降解,然后用特异性的腺病毒捕获珠子结合腺病毒,从而分离出蛋白核酸复合物,洗脱下腺病毒后进一步降解,然后标记其病毒核酸,通过480/520 nm滤镜荧光仪下读取数据,对照腺病毒DNA标准曲线得出腺病毒滴度。

Cell BioLabs腺病毒快速定量试剂盒内包括溶液A、溶液B、溶液C、腺病毒捕获液、Dye染料以及腺病毒DNA标准物。该试剂盒不仅能直接用于已纯化的病毒悬液,对于未纯化的腺病毒,该试剂提供快速纯化试剂,您可以在纯化前通过该kit测算出病毒悬液上清中的腺病毒含量,也可以使用该Kit内的纯化试剂先进行纯化步骤。整个腺病毒定量步骤快捷,可以在45-60min内获得数据,检测灵敏。

另外,该定量试剂盒不仅能应用于腺病毒,由于是通过OD260测量核酸含量从而通过与标准曲线的比对得出腺病毒的含量,因此还能应用于其他的病毒定量。如反转录病毒,慢病毒等。 

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
QuickTiter™ Adenovirus Quantitation Kit VPK-106 荧光检测,20次测定

Cell BioLabs为您提供全套的腺病毒技术解决方案,RAPAD®腺病毒表达系统有多种样式供您选择,还有预装有多种重组基因的腺病毒供您直接使用,ViraBind™腺病毒小提及中提大提试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的腺病毒,Cell BioLabs还有转为腺病毒载体用的293AD细胞及高效转染试剂供您选择,如果您对腺病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

Cell Biolabs预装基因的重组腺病毒

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法,就哺乳动物细胞的基因转染技术,从初期的磷酸钙转染和电转染,发展到脂质体转染技术,但脂质体对于不再分裂,或处于细胞周期后阶段的细胞,或许多原代培养细胞等不能达到有效的转染效率。

而病毒介导基因转移则很好的解决了细胞转染的问题。作为基因转染的载体之一,腺病毒转染效率及感染滴度都比较高,并且外源基因的表达水平也比传统的转染方法高。并且腺病毒具有病毒颗粒比较稳定,可以纯化和浓缩、可感染非分裂细胞、无随机插入的危险性,宿主范围广的特点。考虑到重组腺病毒的制备程序,Cell BioLabs专门为您制备了预装有多种基因的重组腺病毒,有近200多种外源基因重组腺病毒供您选择。

根据基因的种类,Cell Biolabs预装基因的重组腺病毒主要包括以下类型的基因:对照及报告基因(Controler Cell Biolabs预装基因的重组腺病毒and Reporter Genes)、NFΚB信号通路相关基因(NFΚB Signaling)、细胞骨架调控相关基因(Cytoskeleton Regulation)、MAP激酶信号通路基因(MAP Kinase Signaling)、细胞周期相关基因(Cell Cycle)、血管生成相关(Angiogenesis)、肿瘤抗原基因(Tumor Antigens)、酪氨酸激酶及PKC通路(Tyrosin Kinase and PKCs)等。

每个Cell Biolabs预装基因的重组腺病毒试剂包含有50ul病毒液,共有5×109个腺病毒颗粒溶于10%甘油的TBS溶液里,浓度大约为1×1011病毒颗粒/ml,可以直接用于您的实验。如果您对预装基因的重组腺病毒产品感兴趣,请致电垂询更详细的预转基因产品信息。

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供全套的腺病毒技术解决方案,RAPAD®腺病毒表达系统有多种样式供您选择,还有预装有多种重组基因的腺病毒供您直接使用,ViraBind™腺病毒小提及中提大提试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的腺病毒,Cell BioLabs还有转为腺病毒载体用的293AD细胞及高效转染试剂供您选择,如果您对腺病毒产品感兴趣,请请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

CAR非依赖性腺病毒转染——腺病毒高效转染试剂

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法,基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内,并在细胞内表达。转染方法有多种,主要有化学方法如磷酸钙转染、电转染和脂质体转染及生物方法病毒介导基因转移。物理和化学方法转染效率低,而脂质体对于不再分裂,或处于细胞周期后阶段的细胞,或许多原代培养细胞等,如神经细胞,内皮细胞,心肌细胞等等,不能达到有效的转染效率。相反,腺病毒转染效率高。作为基因转染的载体之一,腺病毒具有病毒颗粒比较稳定,可以纯化和浓缩、可感染非分裂细胞、无随机插入的危险性,宿主范围广的特点。

但腺病毒并非对所有细胞的感染效率均令人满意。腺病毒要进入细胞,需先细胞表面的柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)结合,继后在α-整合素介导下被细胞内吞。腺病毒对一些特定细胞的感染受到限制,可能就是由于这些细胞表面缺乏受体和整合素。

上海金畔生物科技有限公司针对上述腺病毒转染中遇到的问题向您推荐Cell BioLabs的ViraDuctin™腺病毒转染试剂(目录号:AD-200/AD-201),由于使用了专利技术,该转染试剂不依赖于CAR的水平,并且比依赖于CAR的常规转染效率要高最多达12倍,甚至能转染一些腺病毒无法转染的细胞,如造血细胞和干细胞。该转染试剂不但能提高转染的效率,而且还同时提高基因转导进细胞后的表达效率!

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraDuctin™ Adenovirus Transduction Reagent (CAR-Independent) AD-200 1次35mm培养皿,10次转染
AD-201 1次35mm培养皿,50次转染
 CAR非依赖性腺病毒转染——腺病毒高效转染试剂 CAR非依赖性腺病毒转染——腺病毒高效转染试剂
ViraDuctin™的增强高效腺病毒转染。 100,000个NIH3T3细胞种植到6孔板上过夜培养,加入50 MOI重组β-Gal慢病毒 (目录号:ADV-002),使用ViraDuctin™腺病毒转染试剂转染NIH3T3细胞,转染48小时后,使用X-gal染色显微镜下观察,左边为不使用ViraDuctin™腺病毒转染试剂对照。
 

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