TMB/辣根过氧化物酶底物/四甲基联苯胺

DAB/辣根过氧化物酶底物/二氨基联苯胺

酶免技术常应用的酶有辣根过氧化酶和碱性磷酸酶，针对不同的酶，所作用的底物是不同的。 

常用的HRP的底物有邻苯二胺（OPD）、四甲基联苯胺（TMB）和ABTS等。其中OPD主要用于ELISA试验，灵敏度高，比色方便。其缺点是配成应用液后稳定性差，而且具有致癌性。TMB是常用HRP酶的显色底物 western blot、Elisa等实验的显色试剂，是一种优于OPD的新型HRP色原底物，经酶作用后由无色变蓝色，目测对比鲜明；加酸停止酶反应后变黄色，可在比色计中定量；因此应用日见增多。

DAB可用于检测过氧化物酶(peroxidase)活性，是辣根过氧化物酶等过氧化物酶的显色底物。经过氧化物酶催化后可产生不溶性棕色产物。可以用于基于过氧化物酶检测的免疫组化、Western等的显色检测。

ABTS是一种水溶性HRP底物，在过氧化物酶的作用下产生绿色终产物。该绿色产物在410nm及650nm具有两个主要吸收峰。在ELISA应用中，ABTS的灵敏度比OPD和TMB稍差。它会被缓慢氧化并显色。相对于OPD或TMB底物高灵敏度造成的不可接受的高背景，虽然灵敏度不如OPD和TMB，但空白值很低。

KPL是美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司，同时也是世界上较大的二抗和底物显色系统生产商。KPL可为您提供HRP的底物： DAB、TMB和ABTS等。以及AP常用底物pNPP、BCIP/NBT/4CN等。

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从细胞或组织中提取纯化蛋白时需要破碎细胞，此时蛋白酶就会被释放出来或被激活，降解蛋白质，最终影响试验结果。为了避免这些情况的出现，建议在样品制备时尽可能在低温下进行。此外，许多蛋白酶在pH9以上就失活了，因此Tris碱，碳酸钠或碱性载体两性电解质往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述条件下仍然保持着活性，此时应当使用蛋白酶抑制剂。因此，选择有效的蛋白酶抑制剂对于蛋白纯化路线设计来讲显得尤为重要。

蛋白酶抑制剂种类繁多，通常使用许多化学物质作为蛋白酶抑制剂，如PMSF 和Leupeptin。而且由于一种蛋白酶抑制剂只对某一类蛋白酶起作用，因此通常建议复合使用蛋白酶抑制剂，如广谱蛋白酶抑制剂“鸡尾酒”，即Protease Inhibitor Cocktail。德国AppliChem提供一系列的蛋白酶抑制剂Protease Inhibitor Cocktail产品，适用于细胞裂解，蛋白提取和多种生化反应。根据不同的样本来源和实验要求，又分为5种Cocktail套装供您选择。这包括了专门用于细胞蛋白提取的Cocktail 1，多用途的蛋白提取Cocktail 2，专用于细菌蛋白提取的Cocktail 3，适用于组织、细胞核细菌蛋白提取的Cocktail 4，通用的细胞组织蛋白提取的Cocktail 5以及专用于细胞中His标签蛋白的提取纯化的Cocktail 6。

上海金畔生物科技有限公司提供的原装进口Protease Inhibitor Cocktail 2 MultiPurpose（蛋白酶抑制剂混合物2）是一种通用/广谱的蛋白酶抑制剂混合物，适用于各种样本的裂解液的制备，如细胞裂解液、组织裂解液等。由AEBSF、Aprotinin、E-64、EDTA及Leupeptin等组成，可以广泛抑制各种蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、类胰蛋白酶以及酯酶等。可以广泛抑制各种蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶以及类胰蛋白酶等。 其中AEBSF是AppliChem独有的蛋白酶抑制剂，其通过磺酰化蛋白酶活性中心的一个基团，不可逆地抑制凝血酶thrombin和其他一些丝氨酸蛋白酶（chymotrypsin, kallikrein, plasmin, proteinase K, trypsin）。AEBSF是PMSF和DFP的低毒替代品，具有较高的水溶性，溶液状态的pH为酸性，且稳定性较高。EDTA能很好的通过螯合作用抑制金属蛋白酶的活性。

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组织芯片(tissue chip)，也称组织微阵列(tissue microarrays)，是将数十个甚至上千个不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一固相载体上，进行同一指标的原位组织学研究。为医学分子生物学提供了一种高通量、大样本以及快速的分子水平的分析工具。
组织芯片是生物芯片技术的一个重要分支，与基因芯片、蛋白质芯片及细胞芯片等一样，属于一种特殊、新型的生物芯片，是一种新型的高通量、多样本的研究的工具。
组织芯片与基因芯片和蛋白质芯片一起构成了生物芯片系列，使人类第一次能够有效利用成百上千份组织标本，在基因组、转录组和蛋白质组三个水平上进行研究，被誉为医学、生物学领域的一次革命。

优点：高通量、体积小、大规模、标准化、信息含量高、误差低、并可根据不同的需要进行组合和设计；

应用前景：
1、基因、转录和表达产物三个水平上进行研究
2、疾病不同发展阶段各基因与基因表达的动态变化
3、疾病相关基因的验证
4、疾病的分子诊断
5、治疗靶点的定位
6、抗体和新药物的开发与筛选
7、治疗过程的追踪和预后等方面

研究方法
1、HE染色                         
2、免疫组织化学（IHC）染色
3、原位杂交（ISH）
4、荧光原位杂交（FISH）
5、原位PCR
6、原位RT－PCR
7、寡核苷酸启动的原位DNA合成（PRINS）

美国lifespan公司成立于1995年，主要提供免疫病理产品，特别是药靶蛋白抗体、蛋白定位与免疫组化等产品。发展至今，lifespan已成为了生物分子病理学方面的领衔品牌。Lifespan为全球客户提供以下几类组织芯片产品：
1.正常组织分析Normal Tissue Arrays（31）
包括多种器官组织：骨髓、骨骼、大脑、结肠、肾脏、肺组织、肝脏组织、淋巴组织、皮肤组织，用于研究人体内不同组织的蛋白表达及定位；
2.多种肿瘤类型分析Multiple Cancer Type Arrays（115）
包括人体多种肿瘤器官组织（含病理分级及诊断信息及对应的正常器官组织），用于筛选抗体和鉴定IHC抗体的组织特异性；
3.单一肿瘤类型分析Single Cancer Type Arrays（554）
包括人体单一肿瘤器官组织（含病理分级及诊断信息，部分包括对应的正常器官组织），用于检测肿瘤组织中蛋白表达，病理的诊断；
4.非肿瘤疾病分析Non-Cancer Disease Arrays（8）
包括非肿瘤疾病的器官组织，如中枢神经系统疾病、心血管疾病，用于此类疾病的诊断；
5.非人类组织分析Non-Human Tissue Arrays（19）
包括猕猴、小鼠、大鼠及恒河猴的正常器官组织，用于种或种属间蛋白表达差异的研究。
6.FDA推荐组织交叉反应筛选分析TCR Screening Arrays（1）
美国FDA推荐的来自不同个体的30种组织，利用抗体与组织中蛋白的交叉反应进行对应抗原定位或疾病的检测。

 上海金畔为lifespan中国一级代理，如果您对文中所用产品感兴趣，请请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司咨询更多lifespan抗体及组织芯片相关资料。