多肽合成技术进展及误区

生物活性多肽在内源性物质中占有非常重要的地位,除酶、受体、金属蛋白等生物大分子外,许多合成或分离的多肽对生理过程或病理过程,对疾病的发生、发展或治疗过程有重要意义。多肽中的氨基酸残基彼此以酰胺键(也称肽键)相连接。一般来说,含有的氨基酸少于10个的肽段就称作寡肽,超过的就称为多肽。多肽与蛋白质只有肽链长短之别,二者间并没有严格的区分。

多肽合成技术进展及误区伴随着分子生物学、生物化学技术的飞速发展,多肽研究取得了惊人的的飞跃。人们发现存在于生物体的多肽有数万种,并且发现所有的细胞均能合成多肽。同时,几乎所有的细胞也都受多肽调节,它涉及激素、神经、细胞生长与生殖等各个领域。事实上,肽类药物开发与应用已走出科学家们的实验室,变成了现实,并发挥着其独特的功效。例如,神经紧张肽(NT)能降低血压,对肠和子宫具有收缩作用;促甲状腺素释放激素(TRH)是一种能促进产妇乳汁分泌的多肽;能治疗糖尿病、胃溃疡、胰腺炎的多肽是一种环状的14肽;临床上常用的催产素是一种多肽;近日来在中国及日本已开始使用的糖肽辅助治疗肿瘤,其作用机理是使淋巴系统活化等等。应用多肽技术开发的医用蛋白质芯片(肽芯片)只有指甲盖大小,放置了与肾炎、胃溃疡和胃癌等相关的抗原分子,只要通过芯片阅读仪便可检测到有关疾病的功能状态与变异情况。肽芯片的广泛应用,已在医学临床检测业引发一场技术革命。

自从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成(SPPS)方法以来,经过不断的改进和完善,到今天这个方法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术,许多普通的单位都可以通过现成的多肽合成方案进行合成。对于新手来说,了解一定的多肽合成的原理,对于认识多肽合成的过程,排除合成中碰到的问题都是有好处的。简单来说,最基本的程序化的多肽合成工艺无非就是树脂溶胀、脱保护、偶联、再脱保护、再偶联……其他特殊的合成都是在这个基础上建立的。对于多肽合成的新手来说,有几个误区需要注意:

多肽合成误区一:合成时间越长越好。多肽合成的效率经过多年的摸索和优化,每一步的合成效率在短时间内都能达到99%以上,过长的反应时间对正面的反应产率提高非常有限,却大大增加了副反应发生的机率,所以过长的反应时间并不好。

多肽合成误区二:万能的切肽试剂。大部分的多肽都可以用一套切肽试剂的组合从树脂上切下来,而对于有特殊侧链保护的氨基酸,往往需要调整这种组合,而对于没有侧链保护的多肽序列,是需要加入98%TFA和2%水的溶液就可以完成,要灵活运用切肽试剂的组合。

多肽合成误区三:氨基酸的侧链保护都一样。带有活泼侧链的氨基酸在合成中需要保护,根据侧链的不同,保护基也有不同的选择。选择适当的保护基可以有效地减少合成的难度。多肽合成技术进展及误区

美国Cali-Bio拥有多肽合成过程中最先进的技术和工艺,已经为美国众多的科研机构、大专院校及生物公司成功合成了数以万计的高纯度的多肽,应用于抗体制备、药物研发及多肽疫苗的研制等各个领域。上海金畔生物科技有限公司将Cali-Bio的多肽合成服务引进中国,结合中国国情,旨在为中国客户提供国外多肽合成的品质、享有国内合成价格的特殊服务。为回馈客户对上海金畔生物科技有限公司产品和服务的支持,现提供美国Cali-Bio多肽合成服务85折特价回馈!详情请点击:多肽合成-美国Cali-Bio多肽合成服务85折特价回馈

如果您对上述多肽合成服务感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司(上海请致电021-63599871/63599872到上海金畔生物科技有限公司上海分公司)垂询相关的定制合成服务,我们会为您完成订单,上海金畔生物科技有限公司会为您做的更多!

如何选择合适的兰花培养基?

近年来,随着经济发展,兰花培育逐渐向工业化生成发展。但由于兰花植物种子发育不全,在自然条件下萌发率极低,繁殖困难。传统的栽培分株繁殖,周期长、育种进程缓慢且繁殖困难。利用植物组织培养技术能够大大提供繁殖速度,植物组培技术已成为兰花生产的主要技术手段。

上海金畔生物科技有限公司代理的美国知名植物培养基供应商PhytoTechLabs(以下简称PhytoTech)为广大客户提供多种兰科类组织培养技术所需的培养基,种类丰富,包括陆生兰科培养基、改良兰科培养基、兰科播种培养基、兰科维持培养基、兰科繁殖培养基、兰科种子休眠培养基等等。那我们如何选择合适的兰花培养基呢?下面我们将PhytoTech的兰花培养基按照属和培养类型分类,帮助客户筛选自己所需的合适的兰花培养基。

陆生兰花培养基选择指南(Terrestrial Orchid Media Selection Guideby Genus)

(Genus)

萌发培养基

(Germination Media)

休眠培养基

(Replate Media)

增值培养基

(Multiplication Media)

Aplectrum

K400

K400, K425

Arethusa

K400, P723

K400, K425, P748

Bletia

B138/B141, K400, P723, V895

P748, V895

Bletilla

P668 1 , P723

P668, P748

O753

Calopogon

K400, P723

P723, P748

Calypso

B138/B141, B142/B470, F522

F522

Coeloglossum

K400

K400, K425, P748

Cymbidium

P668

P668

Cypripedium

B142/B4702, F522, K400

M551, T839, T842 , T849

B138/B141, F522, K400 P668 , T849

O753

Dactylorhiza

F522

F522, P748

Epipactis

B142/B470

B138/B141, P668

Eulophia

P723, V895

P748, V895

Goodyera

M551, P668 , P723

P748

Gymnadenia

F522, M551, P668

F522, M551, P748

Limodorum

B142

B142

Liparis

K400

K400, K425, P748

Oeceoclades

P668, P723, V895

P723, V895

Ophrys

M551

M551

Orchis

F522, M551, P668

F552, M551

Paphiopedilum

P668

P668

Phragmipedium

P668

P668

Platanthera

F522,K400,L472,M551,P668 ,P723

F552,M551,P723,P748

Pogonia

K400

K400

Habenaria

M551, P723

M551, P748

Sacoila

K400, M551

Spathoglottis

P723

P668, P723, P748

O753

Spiranthes

K400, M551, P723

M551, P748

O753

Thelymitra

P723, T839, T842

P748, T839, T842,T849

Tipularia

K400

K400, K425

Zeuxine

P723

P723, P748

附生兰科培养基选择指南Epiphytic Orchid Media Selection Guide by Genus

(Genus)

萌发培养基

(Germination Media)

休眠培养基

(Replate Media)

增值培养基

(Multiplication Media)

Ascocenda

K400, P668 , P723, P785,V895

O156, P668

M507

Brassia

K400, K425, P723

K425, P748

O753

Cattleya

K400, K425, L472, P668 ,P723, P785, V895

K400, K425, O1561 P668 ,P748, P785

M507, O753

Cyrtopodium

P723

P723, P748

Dendrobium

K400, K425, M579, V895

K400,K425,M579,V895

M507, O753

Dendrophylax

P723

P723, P748

Encyclia

P723, P748

P748

Epidendrum

K400, K425, M579, P668 ,P723, V895

K400, K425, M579, P668 ,P723, V895

Gongora

K425, P723

K425, P748

Maxillaria

P723

P748

Oncidium

O156 , P668 , P723

O156,P668,P723, P748

M507, O753

Odontoglossum

K400, K425, O156 , P723

K400, K425, O156

Phalaenopsis

I365, K400, O156, P656,

P668 1 , P723, P782, P785

I365, O156, P656, P668,P748, P785

M507, O753

Pleurothallis

P668, P668 , P723

O156, O156 , P748

Prosthechea

P723

P723, P748

Schomburgkia

P723

P723, P748

Vanda

K400, M579, P723, P785,V895

M579, O156, P723, P748,V895

Vanilla

K400, K425

K400, K425, V895


PhytoTech产品特色:

  • 通过ISO9001:2000质量体系认证
  • 所有产品均按照cGMP标准生产和包装
  • 所有产品的生产过程均受到严格的质量控制
  • 每个产品都经过物理化学以及两个植物品种以上的生物学检测
  • 预混培养基,批件稳定、节省人力时间

如何选择合适的兰花培养基?

PhytoTech公司从1997年成立不断发展壮大,至今已成专业的植物研究领域的试剂与原料供应商,PhytoTech主要产品有各类优质植物组培培养基、植物凝胶、植物生长调节剂、抗生素以及植物学研究所需的各种工具与耗材。

上海金畔生物科技有限公司作为PhytoTech公司的中国一级代理,为广大植物学客户提供高品质植物学产品以及优质的售前售后服务。此外,上海金畔生物科技有限公司代理的Agrisera植物一抗;PCT广谱性高效植物组培抗菌剂PPM;SereCare KPL优质二抗、底物和Cali-Bio琼脂糖、标签内参抗体全方位助力植物学研究,为您带来一站式便捷体验。

若对产品感兴趣欢迎致电上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登陆网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

供应美国Pfanstiehl注射级海藻糖

伴随着生物医药产业从小分子疗法向生物药的转变,关键性原料的管控变得更加复杂,标准也越来越高,除了产品本身的功能性品质,还对cGMP认证、优良的原料产地,以及无动物源成分做出了要求。全世界的科学家门正面临着无休止的培养基成分和赋形剂的筛选工作。科研人员经常发现由于原料的批间差异,会导致前期工作在资源与时间上被大量地浪费。

Pfanstiehl是Ferro集团的全资子公公司,成立于1919 年,具有近百年历史,生产符合cGMP 和ICH Q7A标准的注射级高纯度低内毒素(HPLE)的糖类(海藻糖、蔗糖、麦芽糖、甘露糖、甘露醇等等)、高活性的药用活性成分(原料药)、药用辅料和药物中间体,以及用作其他制药环节用途的各种高纯度糖类,所有的产品都在FDA备案,并且拥有SafeBridge认证,为全球生物医药行业提供了符合行业高标准要求的产品,并在全球单品销售10亿美金的生物炸弹药中,其中7个药品使用Pfanstiehl的糖类作为其辅料,其中5个使用海藻糖,显著区别于目前市场上其他生产厂家在食品GMP条件下生产的符合药典的海藻糖,是市场上可以接受现场审计生产注射级海藻糖的生产企业。2013年Pfanstiehl开始独立运营,为注射型蛋白药、疫苗生产等企业提供更加专业、便捷的优质服务。

此外,Pfanstiehl因应全球客户的需求,开发并在最近发布上市了高纯度、低内毒素、无动物源成分的半乳糖,其原理是通过在细胞培养基中添加半乳糖以达到减少乳酸和氨堆积,从而提高整个细胞培养的表现以及蛋白产量,在治疗性蛋白和生物仿制药领域,收获越来越多的赞誉。

2014年上海金畔生物科技有限公司以与美国Pfanstiehl确定代理关系,并启动注射级海藻糖和蔗糖在药监局的备案工作,国内采购不到药监局备案的注射级海藻糖辅料的时代即将结束。上海金畔生物科技有限公司在国内备有大量Pfanstiehl注射级海藻糖现货。除了美国Pfanstiehl外,上海金畔生物科技有限公司还代理Kerry各种蛋白胨、酵母粉(如HyPep1510、HyPep1512、HyPep4601N、HpPep5603、HySoy、Amicase、Hy Case SF、NZ Amine 等),AppliChem药典级试剂,Cygnus宿主蛋白残留检测试剂盒等,欢迎致电021-50837765了解更多产品信息。

Trehalose is a non-reducing disaccharide consisting of two glucose molecules linked by an α, α–1,1 bond. Pfansteihl Brand, High Purity Low Endotoxin (HPLE) Trehalose is used in the biopharmaceutical industry to stabilize proteins, lipids, and carbohydrates throughout the formulation and freeze/thaw life cycle of therapeutics. It is also widely applied as a key component in cryopreservation/freeze media to stabilize cell membranes and improve the recovery and robustness of cells used for bioproduction and cell therapy.

The stabilizing benefits of trehalose include but are not limited to:
•      Monoclonal Antibodies (mAbs)
•      Fusion Proteins
•      Antibody Fragments (fAbs)
•      Peptides
•      Stem cells
•      Vaccines

Pfanstiehl Brand Trehalose is available as USP-NF (United States Pharmacopoeia—National Formulary), EP (European Pharmacopoeia) and JP (Japanese Pharmacopoeia). Pfanstiehl also holds a US DMF for the Trehalose (T-104-4) product.

附注:

a. ICH(人用药物注册技术要求国际协调会议,International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use)Q7a就代表药物活性成分(通常指原料药)的GMP标准。

b.美国药典(USP)收录的是原料药、成品药及补充剂的质量标准;而美国处方集(NF) 是国家处方集的简称,收录的是制剂中的附加剂即辅料的质量标准。

Trehalose is a non-reducing disaccharide consisting of two glucose molecules linked by an α, α–1,1 bond. Pfansteihl Brand, High Purity Low Endotoxin (HPLE) Trehalose is used in the biopharmaceutical industry to stabilize proteins, lipids, and carbohydrates throughout the formulation and freeze/thaw life cycle of therapeutics. It is also widely applied as a key component in cryopreservation/freeze media to stabilize cell membranes and improve the recovery and robustness of cells used for bioproduction and cell therapy.

The stabilizing benefits of trehalose include but are not limited to:
•      Monoclonal Antibodies (mAbs)
•      Fusion Proteins
•      Antibody Fragments (fAbs)
•      Peptides
•      Stem cells
•      Vaccines

Pfanstiehl Brand Trehalose is available as USP-NF (United States Pharmacopoeia—National Formulary), EP (European Pharmacopoeia) and JP (Japanese Pharmacopoeia). Pfanstiehl also holds a US DMF for the Trehalose (T-104-4) product.

DENARASE®全能核酸酶——宿主核酸去除解决方案

药典中核酸残留限量规定

WHO和各国药物注册监管机构一般只允许生物制剂中存在100 pg/剂量以下的残留DNA,特殊情况下不大于10ng/剂量。根据杂质来源和纯化工艺的不同,一般酵母、大肠杆菌表达的生物制品中DNA残留量不超过10ng/剂量,Vero和MDCK细胞表达的疫苗等生物制品中DNA残留量不超过100pg/剂量或10pg/剂量(根据宿主细胞和给药方式的不同,限量要求不同)。

DENARASE® 全能核酸酶

DENARASE®全能核酸酶是一款通过微生物发酵生产的基因工程非限制性核酸内切酶,其基因序列来自粘质沙雷菌(Serratia marcescens),生产菌株是一种安全级别为S1级且不含内毒素的革兰氏阳性芽孢杆菌(Bacillus.sp.) ,大大降低了内毒素污染风险。DENARASE®是c-LEcta GmbH公司在欧盟、美国、中国、印度、日本和韩国的注册商标(https://denarase.com/)。其拥有的自主专利生产工艺,完全采用非动物性原料,不添加抗生素,符合欧盟GMP生产标准,通过ISO9001:2015质量体系认证,核酸酶纯度大于99%,酶活性高,且无蛋白酶活性,是生物制品生产工艺中常用全能核酸酶的典型代表。

DENARASE®全能核酸酶——宿主核酸去除解决方案

DENARASE®全能核酸酶能够降解所有形式的DNA和RNA,包括单链、双链、线性、超螺旋和环状DNA、RNA及基因组DNA,对核酸序列没有特异性。在纯化工艺中使用DENARASE®全能核酸酶,可有效降低细胞裂解液粘度,改善蛋白纯化工艺,高效去除重组蛋白制品核酸污染,大幅降低终产品污染风险,满足法规要求,在细胞治疗、病毒载体疫苗等领域应用广泛。DENARASE®全能核酸酶的DMF已经提交,目前正处于审核阶段。

核酸酶活性的影响因素分析

DENARASE®全能核酸酶在广泛的条件下仍有很强的生物酶活性,跟大多数生物酶一样,核酸酶的活性也会随温度、pH值、Mg2+、缓冲体系和底物浓度等因素的改变而变化。为了更好的发挥核酸酶的活性,帮助使用者更快的摸索出适宜的反应条件,小编为各位提供一组对核酸酶活性影响较大的关键参数指标供参考。(数据来源于厂家验证指导文件)

温度

适宜反应温度为37℃

pH值

适宜pH值范围是8.0-9.0之间

Mg2+

适宜Mg2+浓度范围是1-2mM

单价阳离子浓度

推荐Na+和K+的浓度在100mM以下

消泡乳化剂

4%的消泡乳化剂对核酸酶活性无明显抑制作用

缓冲系统

高浓度的缓冲体系会抑制核酸酶的活性

Tris盐酸缓冲体系活性大于Tris磷酸盐缓冲体系

底物浓度

DNA底物浓度不大于1mg/mL时活性较高

1 温度

核酸酶适宜反应温度为37℃。

DENARASE®全能核酸酶——宿主核酸去除解决方案

2 pH值

不同缓冲体系结果显示,适宜pH值范围在8.0-9.0之间。

DENARASE®全能核酸酶——宿主核酸去除解决方案

3 Mg2+

辅助因子Mg2+适宜浓度范围是1-2mM,当增大Mg2+浓度时,酶活性会下降。

DENARASE®全能核酸酶——宿主核酸去除解决方案

DENARASE®全能核酸酶——宿主核酸去除解决方案

5 消泡乳化剂

消泡乳化剂常被应用于工业生产的发酵液中,实验结果显示,4%的消泡乳化剂对核酸酶活性无明显抑制作用。

DENARASE®全能核酸酶——宿主核酸去除解决方案

6 缓冲系统

高浓度的缓冲体系会抑制核酸酶的活性,在Tris盐酸缓冲体系中酶活性大于Tris磷酸盐缓冲体系。随着Tris磷酸盐缓冲体系中磷酸盐浓度的增加,酶活性降低,然而Mg2+离子浓度的增加会削弱其抑制作用。

DENARASE®全能核酸酶——宿主核酸去除解决方案

DNA1 (standard):Sigma,D1626(salmon testes)

DNA2:Promega,D181A(herring sperm)

DNA3:GE Healthcare,27456501(200-6000 bps)

DNA4:Millipore,262015

DENARASE®全能核酸酶——宿主核酸去除解决方案

7 底物种类及浓度

核酸酶对不同来源的DNA底物,降解的DNA片段长度不同,下图为不同来源DNA底物,浓度在1mg/mL的结果。为了保持核酸酶的高活性,DNA底物浓度应不大于1mg/mL。

DENARASE®全能核酸酶——宿主核酸去除解决方案

DENARASE®全能核酸酶——宿主核酸去除解决方案

DENARASE®全能核酸酶产品信息

货号

规格

酶活

详情

20804-1M

1 MU (1,000,000 Units)

>250 U/μl

生产和灌装全部符合EU GMP标准;适用于生物制品生产或有GMP要求的应用中添加。

20804-5M

5 MU (5,000,000 Units)

>250 U/μl

20804-100k

100 kU (100,000 Units)

>250 U/μl

生产符合EU GMP标准,灌装按照ISO 9001标准执行;适用于生物制品研发或没有GMP要求的应用中添加。

20804-500k

500 kU (500,000 Units)

>250 U/μl

DENARASE® 全能核酸酶重要参数

c-LEcta GmbH公司为了确保DENARASE®全能核酸酶的稳定和高质量水平,每个批次试剂均满足以下参数的内部验收标准。

酶活: >250 U/μL

纯度: ≥99%

比活度:>6*105 U/mg

蛋白酶活性:无

内毒素:<0.25EU/kU

总菌落数:<250cfu/200μL

免费试用进行中

关注上海金畔生物科技有限公司微信公众号(微信号:jinpanbio),回复“核酸酶试用”,填写表单即可申请c-LEcta DENARASE® 核酸酶免费试用机会,数量有限,先到先得!

星品推荐 | β2-糖蛋白1(β2-Glycoprotein 1)

β2-糖蛋白1(β2-Glycoprotein 1,β2-GP1)属于载脂蛋白超家族成员,能与脂蛋白、阴离子磷脂、血小板、肝素、DNA和线粒体结合。β2-GP1由第I-V结构域组成,其中第I-IV具有保守氨基酸序列组成的结构域及第V突变结构域组成。前4个结构域表现出环形或开放形2种不同的构象,环形构象可以接收来自抗体及脂多糖(LPS)等外源刺激,而开放形构象具有磷脂结合位点,是蛋白质与包括Toll样受体(TLRs)等细胞膜受体和磷脂等进行结合的区域。

星品推荐 | β2-糖蛋白1(β2-Glycoprotein 1)

β2-糖蛋白1的开放形(A)和环形(B)构象

抗β2-GP1抗体与血栓形成密切相关。病理状态下人体内的阴离子磷脂与血清中的β2-GP1结合,使β2-GP1表面结构改变而暴露出抗原位点,诱导产生相应的自身抗体,即抗β2-GP1抗体。抗β2-GP1抗体在血清中正常范围是0~20 RU/ml,若高于该值,主要见于抗磷脂抗体综合征(APS,其敏感性30%~60%,特异性98%) 和系统性红斑狼疮(SLE)患者。抗磷脂抗体主要包括狼疮抗凝物质(lupus anti-coagulant,LAC)和抗心磷脂抗体(anti-cardiolipid antibody,aCL)。同时测定抗β2-GP1抗体和aCL,可使APS的诊断率达95%。检测APS患者血清中抗β2-GP1抗体还可显著提高血栓并发症预测率,因而具有很高的诊断价值。临床上已经可以检测到抗β2-GP1的IgM,IgG和IgA三个亚型的自身抗体,并将其作为常规检测的特征性靶标。此外,抗β2-GP1抗体高于正常值还可见于习惯性流产、类风湿关节炎和川崎病等。

另外据《新型冠状病毒肺炎重症患者相关凝血功能障碍诊疗专家共识》报道,出现凝血功能障碍是加速危重型COVID-19患者死亡的重要合并症之一,而高滴度的抗磷脂抗体则提示自身免疫紊乱与新冠肺炎患者凝血异常、血栓事件发生密切相关,因此,检测血清抗心磷脂IgA抗体和抗β2-GP1 IgA/IgG抗体对此类患者强化抗凝治疗具有重要指导意义。

博百欧作为国内体外诊断试剂核心原料自主研发和生产的高新技术企业,目前专注于自身免疫系统疾病抗原的研发和生产。博百欧现已上市的两款天然β2-GP1抗原分别来源于人和牛的血浆,具备高纯度、高稳定性、高活性、高特异性、低批间差等特点,经多方比对其质量和效价与进口同类产品一致,高性价比,国内现货,欢迎广大客户测试和订购!

星品推荐 | β2-糖蛋白1(β2-Glycoprotein 1)

博百欧β2-GP1抗原聚丙烯酰胺凝胶电泳图:(A)人源β2-GP1;(B)牛源β2-GP1

产品信息

β2-糖蛋白1

Human

Bovine

产品编号

PB-BTA

PB – BB2

原料来源

血浆

血浆

分子量

52 – 54 kDa

58 – 65 kDa

缓冲液体系

16 mM HEPES, pH 7.6

20 mM Tris/HCl, pH 8.0

上海金畔生物科技有限公司是武汉博百欧中国区一级代理,为客户提供一站式体外诊断产品服务。如果您对上述产品感兴趣,欢迎随时拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或者登陆网站www.jinpanbio.cn咨询订购。

参考文献:

[1] Cohen D ,  Berger S P ,  Steup-Beekman G M , et al. Diagnosis and management of the antiphospholipid syndrome[J]. BMJ: British Medical Journal, 2010, 340(may14 1):1125-1132.

[2] YikH ,Kiran A ,  Heinrich K , et al. β2GP1, Anti-β2GP1 Antibodies and Platelets: Key Players in the Antiphospholipid Syndrome[J]. Antibodies, 2016, 5(2):12.

[3] Zhang Y ,  Xiao M ,  Zhang S , et al. Coagulopathy and Antiphospholipid Antibodies in Patients with Covid-19[J]. New England Journal of Medicine, 2020, 382(17).

Pfanstiehl产品D-甘露醇(M-109-7)获得CDE登记号

Pfanstiehl拳头产品之一,D-甘露醇(M-109-7)CDE登记号F20190000351已在CDE网站公布:

Pfanstiehl产品D-甘露醇(M-109-7)获得CDE登记号

截止目前,Pfanstiehl共4个产品在CDE登记注册,号码如下:

1、F20180001457

产品名称:蔗糖,注射级,甘蔗源。

符合美国、欧洲、日本和中国药典

目录号: S-124-1/S-124-1-MC

登记时间: 2018年

2,F20170000125

产品名称:蔗糖,注射级,甜菜源。

符合美国、欧洲、日本和中国药典

目录号: S-124-2-MC

登记时间:2017

3,F20170000098 (JFS1700004)

产品名称: 海藻糖(二水),注射级。

符合美国、欧洲、日本和中国药典

目录号: T-104-4

登记时间: 2015

4,F20190000351

产品名称:D-甘露醇,注射级。

符合美国、欧洲、日本和中国药典

目录号:M-109-7

登记时间:2019

上海金畔生物科技有限公司是Pfanstiehl中国一级代理,为用户提供完善的技术支持与售后服务。如对产品感兴趣欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765了解更多信息。

Alzet渗透压泵应用文献(二)| 给药部位

ALZET® Osmotic Pumps是体积只有胶囊大小的渗透压给药泵,符合USP医疗塑料胶材料生物相容性标准。Alzet泵可以植入实验动物皮下或腹腔内,直接或通过导管以ul/h的速度缓慢持续准确地送出测试药剂。目前,在研究中使用Alzet泵而发表的文献已超过19000篇,研究领域涵盖蛋白与多肽、癌症、心血管疾病、内分泌学、基因治疗、免疫学、神经生物学、药理学、生理学、药物注射方法学、毒理学、动物模型等。

Alzet渗透压泵应用文献(二)| 给药部位

Alzet泵通过植入动物的皮下或腹腔,可以完成试验药物的全身系统性给药。Alzet泵配合不同的导管还能实现静脉、动脉或鞘内等部位的靶向给药。此外,Alzet泵通过连接脑部给药套管,甚至能将药物安全、精准地输注到动物脑室或脑组织。鉴于上述优势,Alzet泵已被广泛应用于将各种试验药物精准输送到不同的靶部位,包括脊髓、脾脏、肝脏、器官或移植组织、伤口愈合部位等,大大方便和提升了动物给药实验的可操作性,为药物研发、动物模型建立等研究应用提供了便利、高效的给药工具。

用Alzet泵做各种部位精准给药的案例非常多,小编在下表中列出了一些动物实验中常用的给药部位且发表过大量文献的案例,文末还为大家提供了这些文献的获取方式,供各位读者参考

Route of Agent Administration

给药部位

Delivery to Wound Healing Sites

伤口愈合部位给药

Delivery to the Ear

耳部给药

Delivery to the Eye

眼部给药

Intra-Arterial Administration

动脉给药

Intracerebroventricular Administration

各种动物脑内给药

Intracerebroventricular Infusion to Rats

大鼠脑内给药

Intracerebroventricular Infusion to Mice

小鼠脑内给药

Intrathecal Administration

鞘内给药

Intratumoral Delivery

肿瘤内给药

Intravenous Administration

静脉给药

Intravenous Infusion to Mice

小鼠静脉给药

Peptide Delivery to the Central Nervous System

中枢神经系统给药

Solid Tissue Microperfusion

致密组织的微量灌注

Targeted Delivery

靶向给药

Targeted Delivery to Peripheral Nerves

外周神经靶向给药


上表中使用Alzet给药的文献资源获取方式:
https://pan.baidu.com/s/1Khh56S_QnTy5EhDTVB99Wg 提取码: bijf

Alzet渗透压泵应用文献(二)| 给药部位

上海金畔生物科技有限公司始终秉承着专业、严谨的态度为广大生物科技领域科研与企业客户提供高品质产品与优质服务。上海金畔生物科技有限公司除了是Alzet中国一级代理之外,还是Applichem中国一级代理、Cygnus中国一级代理、Pfanstiehl中国一级代理、KERRY中国一级代理、博百欧中国一级代理、KPL中国一级代理、Phytotech中国一级代理、Jena Bioscience中国一级代理、SourceBioscience中国一级代理、Cali-Bio中国一级代理、Lifespan中国一级代理、MyBioSource中国一级代理、Agrisera中国一级代理、Cell Biolabs中国一级代理、Mirus中国一级代理等三十多个品牌的中国一级代理或一级代理,能够为广大客户提供优化的一站式产品服务方案。如对上述品牌产品感兴趣,欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

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Alzet渗透压泵常见问题解答

——中国代理美国Kerry植物蛋白胨酵母粉

美国Kerry集团旗下Sheffield Bio-Science服务于全球超过70年,作为全球生物制药疫苗行业细胞营养原料供应商,已成为全球单个药物年销售额超过10亿美金的10个“生物炸弹药”中7个生物药的培养基原料供应商,是一家同时生产酵母粉和蛋白胨并针对不同细胞株/菌种开发提供非动物源性复合添加物系统的生产商,引领全球制药、疫苗、无血清培养基、传统发酵和诊断培养基工业的发展。Kerry的研发团队还为客户提供个性化解决方案和培养基优化定制等服务。

针对不同的生产线,Kerry可以提供不同的产品,如

大肠杆菌培养或其它微生物培养用

植物蛋白胨:Amisoy、Hy-soy、Hy-express system II(直接替换LB培养基中的蛋白胨酵母粉)等

奶源酪胨/动物源蛋白胨:Amicase、Hy-Case Amino、NZ-Amine A等

无尘酵母粉:Hy-Yest 444、Hy-Yest 412等

细胞培养用

成分明确添加物:重组胰岛素、重组人白蛋白、重组抑肽酶

超滤植物蛋白胨:HyPep 1510(大豆来源)、HyPep 1512(大豆来源)、HyPep 4601N(麦麸来源)、HyPep 7504(棉籽来源)

复合添加剂:Sheff Vax系列(疫苗专用)、Sheff CHO系列(CHO细胞专用)系列产品

以上产品配合普通培养基使用可以实现低血清甚至是无血清培养,不仅可以降低成本,而且从此可以摆脱血清紧张的限制。

上海金畔生物科技有限公司是美国Kerry在中国的代理商,欢迎致电021-50837765咨询更多Kerry的产品。除Kerry以外,上海金畔生物科技有限公司还提供AppliChem各种药典级和细胞培养级试剂、Pfanstiehl注射级海藻糖、Cygnus宿主蛋白残留检测试剂盒以及生物工艺污染物检测试剂盒、KPL二抗及各种高灵敏度的检测底物等。

高效率低成本的GMP转染方案,解决细胞和基因治疗生产中的关键问题!

病毒载体技术的进步提高了基因和细胞治疗的安全性和有效性,全球已有多种基因和细胞治疗药物被监管机构批准上市。目前大多数基因/细胞治疗方法都是利用病毒载体来实现的,其中最常用的两种病毒载体——腺相关病毒(AAV)载体常被用于基因治疗,而慢病毒(LV)载体则常被用于基因修饰的细胞治疗。病毒载体通常是将2-4个质粒共转入HEK293细胞生产出的,而转染试剂是病毒载体生产的关键要素之一,对转染效率和功能效价有显著影响。第一代非病毒转染方法依靠简单的线性聚合物,如聚乙烯亚胺(PEI)或脂质体将DNA转入到细胞内,但其性能并不能完全满足病毒载体的大规模生产需求。虽然人工合成转染试剂在过去30年里取得了巨大的进步,但仍然难以逾越大自然在数十亿年进化出的依靠病毒传递基因的效率。因此,优化非病毒转染性能的最佳方法是尽可能模仿出病毒转运DNA的自然机制的试剂。

上海金畔生物科技有限公司代理的Mirus转染试剂就是利用自然基因传递机制作为其化合物库的设计灵感,从中筛选出适合病毒生产的混合配方,将转染试剂与核酸的静电相互作用、细胞吸附与内吞、胞内释放、基因表达效率和降低细胞毒性等几乎所有影响转染成功率的因素全部考虑在内。通过不懈的努力,Mirus开发出了一种全新的仿生转染技术——TransIT-VirusGEN系列转染试剂,它不仅仅是基于PEI或脂质体,而是采用多组分脂质聚合物纳米复合物(LPNC),能够高效地结合和包裹DNA,将其带入悬浮或贴壁的HEK293细胞中,然后将其从细胞核内释放,以便同时满足2-4个不同的质粒的表达,这种全新的转染试剂比单独使用PEI及其衍生聚合物或脂质体的转染效率和完整病毒生产效率都有显著提高。同时,Mirus还研发出了一种完全合成的(无动物源)转染增强剂(Enhancer),与TransIT-VirusGEN转染试剂搭配使用时,可以进一步提高病毒滴度。另外,为了满足病毒载体从研发到大规模生产不同阶段的需求,Mirus分别推出了R&D、SELECT和GMP三种级别的TransIT-VirusGEN转染系列产品,以适应不同阶段病毒载体的生产规模、效率以及法规要求。

实验表明,Mirus基于LPNC的转染试剂可以在不同的细胞培养平台(贴壁和悬浮)、生物反应器和培养基类型中提高病毒产量和功能性病毒滴度。与业内其他金标准相比,在不使用增强剂的情况下,病毒滴度至少可提高2-4倍。而在加入增强剂之后,在合适的培养条件下,病毒产量甚至能够提高10倍以上!(结果见下图1-5)

高效率低成本的GMP转染方案,解决细胞和基因治疗生产中的关键问题!

图1. 基于脂质聚合物纳米复合物(LPNC)和聚乙烯亚胺(PEI)配方的转染试剂用于腺相关病毒(AAV)和慢病毒(LV)载体生产的性能对比。分别用基于LNPC的TransIT-VirusGEN试剂(不含增强剂与含增强剂)、25kda PEI和基于PEI技术的竞争品牌A3转染试剂产生AAV(左)和LV(右)。以LPNC为基础的TransIT-VirusGEN转染试剂比以PEI为基础的转染试剂的病毒颗粒表达量高3-5倍。当TransIT-VirusGEN和增强剂同时使用时,比单独使用TransIT-VirusGEN大约提升了一倍。转染试剂 : DNA的比值为体积 : 质量。

高效率低成本的GMP转染方案,解决细胞和基因治疗生产中的关键问题!

图2. TransIT-VirusGEN转染试剂在不同细胞培养基中的表现。使用 Fisher Scientific公司的病毒生产细胞进行转染,该细胞适应四种不同的培养基配方,分别来自 Fisher公司的LV-MAX培养基、Expi293表达培养基、FreeStyle F17表达培养基和来自Irvine Scientific公司的BalanCD HEK293培养基。后一种培养基的AAV总效价较高,但在所有使用的培养基中,无论是否添加增强剂,TransIT-VirusGEN转染试剂均表现优异。DNA与转染试剂配比为2μg DNA :3μl转染试剂,转染细胞密度为2.0×106个/ml。生产LV也获得了类似的结果(数据未显示)。

高效率低成本的GMP转染方案,解决细胞和基因治疗生产中的关键问题!

图3. 分别在四种不同的转染条件和两个不同的收获时间,测定TransIT-VirusGEN转染试剂和PEI为基础的转染试剂A3的物理滴度和功能滴度。利用Expi293F细胞生产AAV2-GFP。转染48小时和72小时后收获的病毒分别测定功能滴度TU/mL(左)和物理滴度GC/mL(右)。结果显示用TransIT-VirusGEN转染试剂和增强剂转染收获的病毒效价最高。此外,TransIT-VirusGEN转染试剂比PEI为基础的转染试剂的表达更快。这些结果表明,对于病毒滴度的评估,功能滴度可能是一个更可靠的指标。因此,建议测试几个不同的收获时间点来确定最佳方案。

高效率低成本的GMP转染方案,解决细胞和基因治疗生产中的关键问题!

图4. 每种培养体系都应优化转染时的细胞融合度和接种密度。用DMSO+10%胎牛血清培养贴壁的HEK293t/17细胞生产慢病毒(1μg DNA/mL)。试剂盒包括TransIT-VirusGEN转染试剂、VirusGEN LV复合物形成溶液和VirusGEN LV增强剂。

高效率低成本的GMP转染方案,解决细胞和基因治疗生产中的关键问题!

图5. 在Expi293表达培养基中培养Expi293F细胞,使用VirusGEN AAV转染试剂盒,内含TransIT-VirusGEN转染试剂、VirusGEN AAV复合物形成溶液和VirusGEN AAV增强剂,在悬浮细胞培养中生产AAV。分别用2:1(左)和3:1(右)两种比例来确定理想的转染试剂和DNA配比(体积:质量)。每种转染体系都应对转染试剂: DNA配比及每毫升细胞所需的总DNA量进行优化。

TransIT-VirusGEN转染系列产品信息

高效率低成本的GMP转染方案,解决细胞和基因治疗生产中的关键问题!

 

高效率低成本的GMP转染方案,解决细胞和基因治疗生产中的关键问题!

美国Mirus公司成立于1995年,是世界上很早开发高效、低毒转染试剂的公司之一,同时也是目前该类试剂主要的供应商之一。Mirus被公认为转染试剂开发的领跑者,其许多杰出成果获得世界公认与广大用户的好评。

上海金畔生物科技有限公司是Mirus中国区代理,始终秉承着专业、严谨的态度为客户提供优质的产品与服务。如果您对上述产品感兴趣,欢迎致电上海金畔客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多产品信息或申请试用。

引用文献:

Addressing Critical Issues in Cell & Gene Therapy, Snow, J.

(https://www.mirusbio.com/assets/technical-documents/addressing-critical-issues-in-cell-gene-therapy.pdf)

Sheff-Vax非动物源复合添加物在疫苗研发和生产中的应用

蛋白水解物因可以提高各种生物制药生产系统的整体性能而常被用于生产工艺中,比如改善细胞活力、提高细胞增殖和目的蛋白产量、提高病毒培养滴度等等。然而,在一个限定系统中,可能难以同时观察到这些作用,因为每种细胞培养平台都是独一无二的,作为培养基添加物的蛋白水解物也是如此。每种水解物对细胞的生长和生产力都具有不同的作用并会受到多种因素的影响,如细胞系、生产水解物的原材料、生产工艺、水解物用量以及基础培养基的成分等等。

为了满足市场需求,上海金畔生物科技有限公司代理的KERRY品牌从上世纪以来,充分利用在细胞培养基添加物领域中先进的技术与专业积累,开发出了一系列非动物源复合添加物系统,大大提升了各类细胞系的性能,能有效降低生产成本、简化筛选工艺,满足了生物制品领域客户的生产和监管要求。

KERRY非动物源复合添加物系统优势特点:

  • 功能更加强大——集合了KERRY传统产品中植物蛋白水解物和成分明确添加物二者在培养效果上的优点;
  • 产品线更加合理——根据客户对下游纯化要求的不同,分别开发出了含有生长因子的增强版和对下游纯化无影响的无蛋白版本;
  • 针对性更强——对于CHO细胞、杂交瘤细胞、禽类细胞、昆虫细胞以及常用于疫苗生产的各类细胞系都有专门对应的复合添加物产品。

文中小编将重点为大家介绍常用于疫苗研发生产的Sheff-Vax系列复合添加物。

Sheff-Vax非动物源复合添加物在疫苗研发和生产中的应用

1.Sheff-Vax复合添加物介绍

Sheff-Vax复合添加物是一类成分复杂、不含动物源成分(ACF)的培养基添加物系统,根据是否不含蛋白(PF)、添加微量元素(Plus)等各类主要成分的差异,分为以下五个产品(见下表)。Sheff-Vax作为细胞培养基的添加成分,能部分或完全替代血清,为多种类型细胞(如BHK、Vero、SF-9、MDCK、MRC5等)提供生长和生产所需的各类营养,包括氨基酸、多肽、碳水化合物、维生素、微量元素等,不仅能显著提升细胞生长状态,还能提高病毒产量,因而常常被用于病毒疫苗的研发和生产。Sheff-Vax系列添加物已经在多个上市疫苗生产工艺中被添加和使用,如口蹄疫疫苗、戊肝疫苗、流感疫苗等,也是全球多家细胞培养基生产商的常用原料之一。

产品名称

特点与应用

Sheff-Vax ACF

一种成分复杂的培养基添加物,含有生长因子,可显著减少如MDCK、BHK-21和HEK293等细胞培养时的血清使用量。6-8g/L添加量即可满足细胞在DMEM和GMEM培养基中贴壁或悬浮培养的需求,效果优于完全使用血清培养的细胞。

Sheff-Vax Plus ACF

与Sheff-Vax ACF相比添加了各种微量元素,赋予细胞旺盛的生长力,同时增加细胞的蛋白产量和存活时间。Sheff-Vax Plus ACF配合基础培养基使用,可以使MDCK、BHK-21等细胞实现完全无血清的悬浮培养。

Sheff-Vax PF ACF

是Sheff-Vax ACF的无蛋白版本,不含完整无损的蛋白质,适用于对下游纯化有特别要求的细胞培养。分批培养时,推荐添加量为7-9g/L。

Sheff-Vax Plus PF ACF

是Sheff-Vax Plus ACF的无蛋白版,不含完整无损的蛋白质,适用于对下游纯化有特别要求的细胞培养。分批培养时,推荐添加量为7-9g/L。

Sheff-Vax Plus PF ACF VP

是一款无动物源成分、无蛋白的培养基添加物,用于疫苗生产的病毒繁殖阶段,提高病毒滴度的同时限制蛋白的表达,方便下游病毒纯化。该产品在贴壁或悬浮细胞中推荐添加量为6-8g/L。

*注:ACF – Animal Component Free不含动物源成分;PF – Protein Free不含蛋白质;Plus – 含有微量元素。

2. 如何选择和使用Sheff-Vax添加物

在实际应用中发现,上述五种Sheff-Vax添加物对不同类型细胞系的适用性表现也有一定差异,我们可以根据下表来选择和测试合适的Sheff-Vax添加物。对于使用商品化无血清培养基和其他培养基的客户,Sheff-Vax添加物系统也可以用来优化培养基,提高细胞生产效率和促进细胞增长。这种情况下无需驯化细胞,Sheff-Vax可直接添加到无血清培养基中。Sheff-Vax添加物的高活性和稳定性,使其可以应用于大多数商业培养基。

添加物

细胞系

HEK

Vero

PerC6

MRC-5

BHK

CEF

MDCK

SF-9

High-five

S2

Sheff-Vax ACF

Sheff-Vax Plus ACF

Sheff-Vax PF ACF

Sheff-Vax Plus PF ACF

Sheff-Vax Plus PF ACF VP

*注:● 有效;★ 更加有效。

Sheff-Vax添加物的配置方法

Sheff-Vax非动物源复合添加物在疫苗研发和生产中的应用

使用Sheff-Vax添加物替代血清的培养过程中,需要先进行细胞驯化,逐代降低血清浓度,同时增加Sheff-Vax添加物浓度,进而实现降低或完全去除血清和其他动物源成分的培养方案,如下表所示。

细胞传代次数

对照组

驯化组

1

100%对照培养基

100%对照培养基 + 0%驯化培养基

2

100%对照培养基

75%对照培养基 + 25%驯化培养基

3

100%对照培养基

50%对照培养基 + 50%驯化培养基

4

100%对照培养基

25%对照培养基 + 75%驯化培养基

5

100%对照培养基

0%对照培养基 + 100%驯化培养基

*注:对照培养基:基础培养基+10% FBS; 驯化培养基:基础培养基+Sheff-Vax添加物。

3.Sheff-Vax添加物应用案例

1)使用Sheff-Vax Plus PF ACF对BHK细胞的降血清驯化案例

Sheff-Vax非动物源复合添加物在疫苗研发和生产中的应用

BHK细胞降血清培养生长曲线对比

该驯化培养过程添加了Sheff-Vax Plus PF ACF来降低BHK 培养基中FBS的使用量,把FBS浓度从10%降低到0.5%依然可以保持很好的细胞生长状态。(注:在整个驯化传代过程中,培养基需要添加0.5%的PluronicF-68来防止细胞凝聚成团。)

2)使用Sheff-Vax ACF对Vero细胞的无血清驯化案例

使用Sheff-Vax添加物可以实现Vero细胞的无血清培养,在逐步减少血清用量直至完全去除血清后,Vero细胞生长形态无显著变化(见下图)。

Sheff-Vax非动物源复合添加物在疫苗研发和生产中的应用

Vero细胞生长形态对比

(A)对照组:DMEM+10%胎牛血清;

(B)实验组:DMEM+0%胎牛血清+2g/L Sheff-Vax ACF+10mg/L rInsulin。

每次传代逐步减少FBS,同时添加Sheff-Vax ACF,在相同培养时间内,无血清组细胞生长密度可达到10% FBS组细胞密度峰值的一半,延长培养时间还可以获得更高的细胞密度(见下图)。

Sheff-Vax非动物源复合添加物在疫苗研发和生产中的应用

Vero细胞生长曲线对比

(i) 10% FBS, (ii) 7.5% FBS, (iii) 5% FBS,(iv) 2.5% FBS, (v) 1.5% FBS, (vi) 1% FBS, (vii) 0.5% FBS, (viii) 0.25% FBS, (ix) 0.1% FBS, (x) 0% FBS

3)添加Sheff-Vax可以获得更高的病毒滴度

分别在培养狂犬病毒和麻疹病毒的细胞培养基中添加不同的Sheff-Vax产品,与对照组相比均能有效提升病毒生产滴度。在病毒增殖阶段添加Sheff-Vax Plus PF ACF VP对病毒滴度也有显著的提升(见下图)。

Sheff-Vax非动物源复合添加物在疫苗研发和生产中的应用

添加Sheff-Vax培养的病毒滴度对比

综上所述Sheff-Vax复合添加物在疫苗研发生产过程中具有非常多的优势,主要表现为:

  • Sheff-Vax是一系列非常适用于细胞疫苗生产的非动物源添加物;
  • Sheff-Vax具有可靠的批间一致性
  • Sheff-Vax发挥与血清相同的生物学功能
  • Sheff-Vax能有效提升病毒疫苗的生产效率;
  • Sheff-Vax的高性价比能显著降低生产成本。

上海金畔生物科技有限公司是KERRY品牌的中国区一级代理,如果您对上述产品感兴趣,欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录www.jinpanbio.cn获取更多产品资料和申请测试样品。

7月新品上市

Applichem新品

ExitusPlus  Activity Test核酸污染清除试剂活性测定试纸(货号A9411)

7月新品上市

用于测定核酸污染清除(A7089和A7409)试剂的活性。用户手中的核酸污染清除试剂已过复检期或计划重复利用时,可利用该试纸测定试剂是否还有清除核酸污染能力。
使用方法:
取待测溶液少许,试纸浸入30秒,取出试纸比色,比对结果显示在“sufficient efficacy”区间的即为有活性,可以继续使用。


Cell Biolabs新品

Cas9蛋白ELISA检测试剂盒 (货号:PRB-5079)

Cas9蛋白(CRISPR相关蛋白9)是目前应用广泛且高效的基因编辑工具,它可以使DNA特定位点断裂,通过非同源末端连接或同源重组使特定基因失活或引入外源基因。利用CRISPR/Cas9系统已经在人类和动物细胞中实现了特定基因的缺失和替换。

7月新品上市

CellBiolabs品牌新推出的Cas9 ELISA试剂盒采用免疫学方法,可用来定量检测细胞或组织裂解液中Cas9蛋白(S. pyogenes链球菌来源)的浓度,进而从蛋白水平上评估基因编辑效率。该试剂盒检测灵敏度为1.5ng/mL Cas9,每个试剂盒最多可检测96个样品(包括标准曲线和待测样品)。



Phytotech新品

Systemin 系统素(货号:S7625)

7月新品上市

Systemin系统素是由18个氨基酸(即AVQSKPPSKRDPPKMQTD)组成的多肽信号传递分子。当植物被昆虫食害后,系统素从伤害处传遍未受伤害的部分,促进蛋白酶抑制剂基因的活化和转录,从而增加蛋白酶抑制剂的合成,防御昆虫的食害。

PSK-α 植物磺肽素/植物硫激素(货号:P6633)

7月新品上市

PSK-α(Phytosulfokine-alpha)是一种磺化五肽生长因子,广泛存在于单子叶植物和双子叶植物中,对植物细胞的增殖和分化具有重要作用。PSK-α可以诱导水稻细胞增殖,还能促进侧根、初生根、下胚轴和小孢子等其它组织的生长发育。PSK-α是一种新发现的能促进细胞分裂和分化的多肽类植物内源激素。

Melatonin 褪黑素(货号:M5520)

7月新品上市

Melatonin传统上被认为只是哺乳动物和人类的松果体产生的一种胺类激素。但最近发现其天然存在于大多数植物中,并且已有研究表明可将其属性归类于生长素。它在植物防御、生长发育、压力胁迫以及抗氧化活性上具有重要作用。

如何应对植物组培过程中的污染问题?新型高效方法值得推荐

植物组织培养是20世纪初发展起来的一门新兴技术,随着这项技术的日益完善,其应用也越来越广泛。但是在组织培养过程中,常常会遇到污染问题使实验无法进行下去,甚至导致整个实验失败,给科研和工厂化生产带来损失。

污染是指在植物组织培养过程中,培养基和培养材料滋生杂菌,最终导致培养失败的现象。常见的污染类型包括:由霉菌引起的真菌性污染、多由外植体带菌引起的细菌性污染、长期多次继代引起的内生菌污染以及农杆菌污染等。面对植物组培污染问题,我们通常采取在培养基中加入适量的抗生素(如青霉素、链霉素、氯霉素等)来抑菌。但是抗生素一般不稳定,遇酸、碱或加热都易分解而失去活性。而且单一抗生素抑菌容易产生抗药性,一旦停止使用,污染率就会显著上升。同时,高浓度的抗生素会影响植物的生长。

如何应对植物组培过程中的污染问题?新型高效方法值得推荐图片1

为解决上述问题,我们推荐专业植物组培高效广谱性抗菌剂PPM™,它可以有效预防和清除由于空气、灭菌不彻底、交叉污染、外植体消毒等各种原因导致的植物组培苗的真菌、细菌、内生菌和农杆菌污染。可以加入培养基高温灭菌;而且在合理使用剂量下,不会对植物的生长产生任何影响。

如何应对植物组培过程中的污染问题?新型高效方法值得推荐

      使用方法如下:

1、      常规污染预防用量:

一般推荐使用浓度为0.05%-0.2%(1L培养基中加入0.5-0.75ml PPM™);愈伤增殖, 器官形成,胚性组织发育等使用浓度为0.05%-0.075%。

2、      植物内生菌污染处理:

      种子:PPM™不推荐用于直接处理含有大量的细菌或真菌孢子的种子灭菌;对于种子离体萌发,建议先采用传统方法消毒,然后置于含 2-3%PPM™的全培养基础盐溶液中,轻轻搅拌4-12小时,此过程千万不能添加Tween20和调节pH,处理完成以后直接插入含有 PPM™(草本植物0.05-0.1%,木本植物0.2%)的培养基里进行培养。

      外植体::以 1cm 外植体为例,将外植体置于含 4-5%PPM™的全培养基础盐溶液中,轻轻搅拌4-12小时,此过程千万不能添加 Tween20和调节pH,处理完成以后直接插入含有PPM™(草本植物 0.05-0.1%,木本植物0.2%)的培养基里进行培养。

      块茎,球茎和鳞状物的观赏植物样本:将其整体放入消毒剂中搅拌消毒处理以后, 用水冲洗干净,将材料切成薄片,置于含 4-5%PPM™的全培养基础盐培养液中,轻轻搅拌4-12小时,此过程千万不能添加Tween20 和调节pH,处理完成以后无需冲洗直接插入含有 0.1-0.2%的PPM™的培养基里进行培养。

3、      如果厚的外植体、污染严重的植株、种子等样本经过以上处理仍得不到理想效果,可尝试以下操作:

      将材料浸泡在水中持续搅拌处理(松软组织搅拌1小时,硬实组织搅拌2小时)

      将材料在含50%的PPM™全培养基础盐溶液中搅拌处理5-10分钟,此过程千万不能添加 Tween20 和调节pH

      无需冲洗,将处理过的材料直接加入到培养基中即可。对于真菌污染,可在培养基中加入适当浓度的PPM™。对于真菌细菌混合性污染,建议在培养的第一个月的培养基中加入0.05%-0.2%的PPM™

4、      严重污染材料污染去除与抢救(重污染不超过一周)

      将污染的材料至于流水中用软刷刷洗,然后置于含50% PPM™的无菌水溶液中搅拌5-15分钟;对于细菌或者混合性污染,建议使用 100% PPM™与 0.6g/L 的柠檬酸无菌水溶液按 1:1 混合的低 pH(2.8-3.2)的酸性溶液处理

      处理后的材料无需清洗,直接插入含0.05%-0.25的PPM™的培养基中培养至少一个月以上,其中前10天需要弱光培养

5、      农杆菌的去除

共培养以后,将样本用无菌水清洗,然后将样本浸没在 100% PPM™(补充4X的培养基盐溶液)中处理2分钟,取出后用无菌纸吸干后并置于常用抗性培养基中培养,3 周后,更换到只含有0.05%-0.075% PPM™(无常用抗生素)的培养基中培养。

如何应对植物组培过程中的污染问题?新型高效方法值得推荐图片2

      注意事项:

      在所有 PPM™消毒处理外植体的过程中,尽量保证容器的体积足够大,并使外植体材料所有面积与含PPM的处理溶液充分接触,以保证消毒效果;

      如果外植体出现高度氧化现象,不要扔弃,大约50%的外植体在 4-6 周内即可恢复

      50% PPM™ 的处理溶液可以重复使用但是不推荐,因为使用次数和效果受外植体的体积与接种密度的影响。将50% PPM™的处理溶液保存在4ºC可适当延长其活性,一般可使用不超过10次。如果必要,建议配制2份50% PPM™溶液,一份用于外植体消毒内生菌污染,另一份用于消除“培养过程中”的轻度污染材料抢救,第二份溶液在每次处理过后需要用 0.2mm滤器过滤

      如果50%PPM™溶液处理效果不理想,可采用100%PPM™溶液进行处理,处理方法相同,但使用次数不得超过10次。

      产品信息:

如何应对植物组培过程中的污染问题?新型高效方法值得推荐图片3

产品已发表文献:

  1. Miyazaki J, Tan BH, Errington SG.  Eradication of endophytic bacteria via treatment for axillary buds of Petunia hybrida using Plant Preservative Mixture (PPMTM). PCTOC. 2010;102(3):365-372.
  2. Miyazaki J, Tan BH, Errington SG, Kuo JS. Bacterial endophyte in Macropidiafuliginosa: its localisation and eradication from in vitro cultured basal-stem callus. Aust J Bot. 2011;59(4):363-368.
  3. Lata H, Chandra S, Khan IA, ElSohly MA. Propagation through alginate encapsulation of axillary buds of Cannabis sativa L. — an important medicinal plant.  Phys and Mol Biol of Plants. 2009;15(1):79-86. 4. Greer SP, Rinehart TA.  Dormancy and Germination In Vitro Response of Hydrangea macrophylla and Hydrangea paniculata Seed to Light, Cold-Treatment and Gibberellic Acid. J. Environ. Hort. 2010;28(1):41–47.
  4. Greer SP, Rinehart TA.  Dormancy and Germination In Vitro Response of Hydrangea macrophylla and Hydrangea paniculata Seed to Light, Cold-Treatment and Gibberellic Acid. J. Environ. Hort. 2010;28(1):41–47.
  5. Moghaddam S, et al. Optimization of an Efficient Semi-Solid Culture Protocol for Sterilization and Plant Regeneration of Centellaasiatica (L.) as a Medicinal Herb. Molecules. 2011;16(11): 8981-8991
  6. Çolgecen H, Koca U, Toker G. Influence of diff erent sterilization methods on callus initiation and production of pigmented callus in ArnebiadensifloraLedeb. Turk J Biol. 2011; 35:513-520
  7. Pouvreau J, et al. A high-throughput seed germination assay for root parasitic plants. Plant Methods 2013;9:32
  8. Marecik R, Bialas W, Cyplik P, Lawniczak L, Chrzanowski L. Phytoremediation Potential of Three Wetland Plant Species Toward Atrazine in Environmentally Relevant Concentrations. Pol. J. Environ. Stud. 2012;21(3):697-702
  9. Pérez Flores J, Aguilar Vega ME, Roca Tripepi R. Assays for the in vitro establishment of Swietenia macrophylla and Cedrelaodorata. Rev. Colomb. Biotecnol. 2012;14(1)
  10. Nesterenko-Malkovskaya A, Kirzhner F, Zimmels Y, Armon R. Eichhorniacrassipes capability to remove naphthalene from wastewater in the absence of bacteria. Chemosphere. 2012;87(10):1186-1191.
  11. Kieffer M, Fuller MP. In Vitro Propagation of Cauliflower Using Curd Microexplants. Meth Mol Biol. 2013;994:329-339.
  12. Kodym A, Temsch E, Bunn E, Delpratt J. Ploidy stability of somatic embryo-derived plants in two ecological keystone sedge species (Lepidospermalaterale and L. concavum, Cyperaceae). Aust J Bot. 2012;60(5):396-404.
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  14. Haddadi F, Adb Aziz M, Saleh G. Abd Rashid A, Kamaladini H. Micropropagation of Strawberry cv. Camarosa: Prolific Shoot Regeneration from In Vitro Shoot Tips Using Thidiazuron with N6-benzylamino-purine. HortScience. 2010;45(3):453-456.
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上海金畔生物科技有限公司是美国Plant CellTechnology中国代理,为用户提供完善的技术支持与售后服务。

Mirus 品牌介绍+产品介绍

近日上海金畔生物科技有限公司成为美国Mirus中国地区一级代理,双方携手为国内科研工作者提供专业的转染试剂。

从基础研究到产品开发,Mirusbio的生物学家利用他们在核酸化学、细胞及分子生物学领域的专长,建立了创新的技术和产品开发,这些技术和产品被广泛应用于生命科学研究。十年前,Mirusbio的首批产品就体现了它在非病毒基因治疗研究方面所取得的进展。之后,Mirusbio的科学家们在为生命科学研究提供相关研究工具方面做出了重大的贡献。

Mirus以“非病毒(如基于质粒DNA)基因转移方法比利用病毒来转移基因具有明显的优势”为理念而建立。沿着该思路,Mirus利用蛋白、多聚物、脂质体(结合有增强核酸转移能力的独特化学物)开创了多种非病毒法基因转移技术。Mirus被公认为是核酸研究试剂开发的领跑者,其许多杰出成就受到世界公认:

1、首先研发出siRNA转染试剂;

2、世界上最早开发高效、低细胞毒性转染试剂的公司之一;

3、首先向市场推出“一步法”核酸标记技术;

4、独特的小分子RNA如microRNA标记技术;

Mirus旗下产品主要是以转染试剂为主,脂质体转染法,电转染法用的转染试剂都有很多种类和很好的效果。

1、Transfection Reagents

-TransIT® transfection reagents(DNA,RNA ,oligo)

– Cell line specific kit

– beta-gal staining kit

– labeled controls

2、Electroporation Solutions

– electroporation kit

– electroporation solution

– Ingenio® Cuvettes

– Ingenio® Cell Droppers

3、Label IT® Labeling Reagents

– DNA & RNA, including miRNA

4、In vivo Delivery

– DNA,siRNA delibery

– expression vectors

Mirus产品在大多数细胞中都有很高的转染效率,尤其在难转染的细胞中也同样适用。其次和其他转染试剂相比,生物毒性也是非常低的,在原代细胞和干细胞中都具有很好的转染效果。感兴趣的客户请登录http://www.mirusbio.com/ 查看产品详细介绍。

上海金畔生物科技有限公司公司也提供以下几种产品的试用装和使用反馈表,如果您对上述产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的最优产品和解决方案,或索取相关手册和资料。我们会为您做的更多!

Hampton Research | 助力蛋白结晶结构学研究

蛋白质结晶是处于沉淀和溶液之间的一种状态,其形成是由于蛋白质分子之间通过规律地排列而形成规则固体。

Hampton Research | 助力蛋白结晶结构学研究

(图片来源于Hampton Research公司)

因为蛋白质具有离子的性质,理论上蛋白质在合适的条件下是可以结晶的,蛋白质又具有离子不具备的特性,比如蛋白质种类繁多、成分复杂、分子量大等,不像NaCI那样,去掉水就自动结晶,剧烈的条件改变会引起蛋白的变性,使蛋白失去稳定结构而不再可能结晶。

如果想要蛋白质结晶,我们首先需要对目标蛋白有足够的了解,因为影响蛋白质结晶的因素非常多,包括蛋白质的缓冲体系、是否有翻译后修饰、是否有二硫键或游离半胱氨酸、是否有蛋白酶抑制剂存在、蛋白质适合的pH值范围、蛋白质是否为多聚体以及是否为跨膜蛋白等,这些因素都会影响蛋白质结晶的成功与否。

因此,大部分科研工作者会筛选非常多的条件来寻找最优结晶条件,这时我们就需要筛选试剂来辅助蛋白结晶工作。美国Hampton Research公司有非常广泛的产品组合,包括结晶初步筛选、结晶优化筛选、定制单组分结晶试剂和结晶生长优化试剂等。除了筛选试剂外,美国Hampton Research公司还有各种结晶板、配套工具、低温晶体学相关产品和蛋白结晶相关书籍等,为广大蛋白结晶领域的科研工作者提供了方便。

上海金畔生物科技有限公司作为美国Hampton Research公司在中国的官方代理,一直致力于为蛋白结晶领域科研人员提供优质的一站式产品和服务,现将Hampton Research部分热卖产品列表汇总如下,仅供参考,如果您对上述产品感兴趣,欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或联系在线客服获取更多产品资料。


Hampton Rese
arch部分热卖产品列表

产品类别

货号

品名

规格

简介

蛋白结晶筛选试剂盒

HR2-144

Index

10 ml, tube format

蛋白质、络合物、多肽、核酸和水溶性小分子等多种试剂体系的经典结晶条件初筛选试剂盒,包含96个条件

HR2-110

Crystal Screen

10 ml, tube format

蛋白、可溶性多肽、核酸和水溶性小分子等多种试剂体系结晶条件初筛试剂盒,包含50个条件

HR2-114

MembFac

10 ml, tube format

适用于膜蛋白的结晶条件初筛试剂盒,包含48个条件

HR2-116

Natrix

10 ml, tube format

核酸、核酸/蛋白质复合物结晶条件初筛试剂盒,包含48个条件

HR2-082

PEGRx 1

10 ml, tube format

聚合物和pH条件初筛与二次筛选试剂盒,包含48个条件

HR2-126

PEG/Ion Screen

10 ml, tube format

聚合物、盐和pH条件初筛与二次筛选试剂盒,包含48个条件

HR2-107

SaltRx 1

10 ml, tube format

盐和pH条件初筛与二次筛选试剂盒,包含48个条件

蛋白结晶优化试剂盒

HR2-072

Solubility & tability Screen

0.5 ml, Deep Well block format

溶解度和稳定性筛选,包含96个条件

HR2-070

Slice pH

0.5 ml, Deep Well block format

pH筛选试剂盒,包含96个条件

HR2-138

Additive Screen

1 ml, Deep Well block format

添加剂筛选试剂盒,包含96个条件

HR2-459

GRAS Additive

1 ml, Deep Well block format

GRAS添加剂筛选,包含96个条件

HR2-096

Silver Bullets

0.50 ml, Deep Well block format

添加剂筛选试剂盒,包含96个条件

HR2-407

Detergent Screen

0.25 ml, Deep Well block format

洗涤剂筛选试剂盒,包含96个条件

HR2-214

Ionic Liquid Screen

0.5 ml, tube format

离子液体筛选试剂盒,包含24个条件

HR2-241

StockOptions pH

10 ml, tube format

晶体生长筛选试剂盒,包含45个条件

HR2-102

StockOptions HEPES

10 ml, tube format

晶体生长筛选试剂盒,包含15个条件

HR2-227

StockOptions Polymer

10 ml, tube format

晶体生长筛选试剂盒,包含23个条件

HR2-245

StockOptions Salt

10 ml, tube format

晶体生长筛选试剂盒,包含49个条件

HR2-073

CryoPro

1 ml, tube format

晶体冷冻保护剂筛选,包含48个条件

蛋白结晶耗材工具

HR2-320

Seed Bead Kit

24 tubes with PTFE Seed Bead

晶种制备珠

HR3-158

Cryschem Plate

24 plate case

24孔坐滴板

HR3-231

Siliconized circle cover slides

1.0 ounce pack (~120 slides)

圆形硅化玻璃盖玻片

HR3-609

Crystal Clear Sealing Film

100 pack

结晶板封口膜

HR4-216

Crystal Crusher

5 pack

晶体粉碎器

HR4-217

Crystal Probe

12 pack

一次性不锈钢晶体针

HR4-733

CrystalCap

with Vial – 60 pack

晶体环底座

HR4-811

Micro-Tools Set

each

晶体处理工具套装,含8个不同形状的晶体探针

Hampton Research | 助力蛋白结晶结构学研究

美国Hampton Research公司位于加利福尼亚州,成立于1991年,是一家从事蛋白质晶体研究研制的专业公司,为全球科研人员提供全面的蛋白晶体研究试剂、相关工具耗材及完整的晶体培养整体解决方案。美国Hampton Research公司以其先进的生物大分子结晶技术和广泛的生产线,长期以来在蛋白结晶领域拥有很高的知名度,为科研人员提供了方便,促进了蛋白质晶体结构学的研究,为世界范围内的蛋白质晶体研究人员所信赖。

上海金畔生物科技有限公司作为专业服务中国生命科学领域16年的供应商,以专业和优质的服务赢得了众多客户的支持和信赖!为高校、科研院所提供先进技术与优化的一站式产品服务方案,帮助用户缩短科研时间、节约科研成本、提升科研水平、增强企业市场竞争力。上海金畔生物科技有限公司的核心理念是“We promise what we can do. We do what we have promised”。更多产品信息欢迎致电上海金畔全国客服热线021-50837765或登录官网www.jinpanbio.cn查询和了解。

参考文献:

  1. D’Arcy, A., 1994. Crystallising proteins – A rational approach. Acta Crys­tallogr. D 50, 469–471.
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  3. Hydrogen ion buffers. Good, Norman E.; Izawa, Seikichi (1972). Meth­ods Enzymol. 24: 53–68.
  4. Hydrogen Ion Buffers for Biological Research. Ferguson, W. J.,Braunschweiger, K. I., Braunschweiger, W. R., Smith, J. R.; McCor­mick, J. J., Wasmann, C. C., Jarvis, N. P., Bell, D. H.; Good, N. E. (1980). Anal. Biochem. 104 (2): 300–310.
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  8. How to Use Dynamic Light Scattering to Improve the Likelihood of Growing Macromolecular Crystals. Gloria E. O. Borgstahl. Methods in Molecular Biology, vol. 363: Macromolecular Crystallography Pro­tocols: Volume 1: Preparation and Crystallization of Macromolecules, Pages 109-129, Edited by: S. Doublié© Humana Press Inc., Totowa, NJ.
  9. Light scattering of proteins as a criterion for crystallization. Zulauf, M. and D’Arcy, A. (1992), J. Cryst. Growth 122, 102–106.
  10. Dynamic light scattering in evaluating crystallizability of macromol­ecules. Ferré-D’Amaré, A. R. and Burley, S. K. (1997) Meth. Enzymol. 276, 157–166.
  11. Protein Crystallization Techniques, Strategies and, Tips. Bergfors, T. M. (1999) International University Line, La Jolla, CA.
  12. fluor-based high-throughput stability optimization of pro­teins for structural studies. Ericsson, U.B., Hallberg, M.B., DeTitta, G.T., Dekker, N. & Nordlund, P. Anal. Biochem. 357, 289–298 (2006).
  13. High-density miniaturized thermal shift assays as a general strategy for drug discovery. Pantoliano, M.W. et al. Journal of Bimolecular Screen­ing, Volume 6, Number 6, 2001.
  14. The use of differential scanning fluorimetry to detect ligand interac­tions that promote protein stability. Niesen, F.H. et al. Nature Protocols, 2212-2221, Volume 2, No. 9, 2007.
  15. An improved protocol for rapid freezing of protein samples for long-term storage. Hol, W.G.J. et al, Acta Cryst. (2004). D60, 203-204.
  16. The protein as a variable in protein crystallization. Dale GE, Oefner C, D’Arcy A. J Struct Biol. 2003 Apr;142(1):88-97.
  17. 蛋白质晶体结构解析原理与技术,北京大学出版社,苏纪勇,姚圆 著

Pfanstiehl注射级辅料精氨酸盐酸盐正式上市

产品名称:L – Arginine Hydrochloride, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals, USP, EP, JP, ChP

产品货号:A-171

产品品牌:Pfanstiehl

产品特点:

  • 注射级,高纯度,低内毒素
  • 低金属杂质残留,符合ICH Q3D标准
  • 植物来源,符合GMP标准
  • 符合多国药典标准
  • 美国DMF和中国CDE药用辅料登记工作正在进行中

Pfanstiehl注射级辅料精氨酸盐酸盐正式上市

Pfanstiehl致力于为全球生物制剂公司提供高质量注射级药用辅料,主要产品注射级海藻糖(T-104-4)、蔗糖(S-124-2-MC和S-124-1-MC)、甘露醇(M-109-7)、无水琥珀酸钠(D-160)、六水琥珀酸钠(D-161)、组氨酸(H-116)、组氨酸盐酸盐(H-117)、精氨酸(A-170)等产品已经获得CDE药用辅料注册号,其中海藻糖和蔗糖已经处于激活状态。

Pfanstiehl注射级辅料精氨酸盐酸盐正式上市

上海金畔生物科技有限公司为Pfanstiehl中国代理,如有产品咨询和新老产品样品申请,请直接沟通上海金畔生物科技有限公司热线电话:021-50837765