什么是支原体？
支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径 0.2μm)并独立生活的微生物，没有细胞壁，表面由胞质膜构成，约有 1%的支原体可通过滤菌器。支原体污染细胞后，培养液可不发生混浊，多数情况下细胞病理变化轻微或不显著。细微变化也可由于传代、换液而缓解，因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢，甚至从培养器皿脱落。支原体污染细胞后会影响下游试验结果。
为什么要重视细胞培养中的支原体污染？
1、污染率高：在细胞研究领域，支原体是臭名昭著的污染源，二十世纪九十年代的支原体污染率是四分之一，而目前有仍然有超过十分之一的基因表达研究（许多曾发表在顶尖杂志上），表现出支原体污染的迹象；
2、影响日趋严重：虽然支原体污染并不一定意味着研究结果无效，但它会影响数百个基因的表达，并与细胞竞争营养阻碍细胞的生长。在目前测试的一组受污染的数据中（淋巴瘤细胞），已经鉴定出 61 个被支原体改变的基因，干扰了实验结果。这无疑是对时间，资源，经费很大的浪费；
3、难察觉：支原体污染完全是不留痕迹的，污染后的细胞生长速率一般并未发生显著的影响，无法用肉眼识别，除非采用专门的支原体检测方法检测；
4、污染源多：“草率操作”、细胞系流通的交叉污染、操作人员自身都是很重要的污染源；
5、难去除：支原体体积小，无细胞壁，约有 1%的支原体可通过过滤器，且一般抗生素根本无法有效抑制或者去除支原体，另外，部分抗生素使用后会对细胞产生敏感效果，从而影响细胞的状态；
6、重视程度日益增加：学术杂志发表实验结果需验证支原体污染影响，在国际上，支原体污染检测已经日益成为细胞培养污染常规检测之一，同时也是有效规避支原体污染的重要方法之一。
世界性难题！！！！Nature 収布癿文献表明细胞研究领域中存在严重的支原体污染问题
Ewen Callaway. Contamination hits cell work. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a
如何保护细胞细胞不受支原体的污染？
上海金畔生物科技有限公司代理的德国 PanReac Applichem 所提供 Myco 系列支原体清除产品可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性，从而有效地清除支原体污染，而且没有细胞毒性。另有支原体检测与预防系列产品可以给细胞提供更多的安全保护。
一、AppliChem 支原体清除系列
对于普通细胞系，遭受污染以后可以通过重新复苏，购买等途径更换样本，但是对于一些较难获得的珍贵样本，如干细胞，原代细胞，经过特殊处理的，或订购困难的细胞，一旦遭受支原体污染后，一定要马上进行处理。AppliChem研发的支原体清除的 Myco 系列产品，可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性，从而有效的清除支原体污染，并可以针对不同程度，不同细胞样本进行针对性处理，处理过程简单，对细胞不会造成任何副作用。
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名称 |
主要成分 |
适用样本 |
使用斱法 |
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Myco-3 （货号 A5240） |
环丙沙星 |
贴壁细胞，可清除大多数支原体污染 |
100 倍稀释加入培养基，每 2-3 天换液，连续处理14天 |
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Myco-1 （货号 A5222） |
泰妙菌素 |
贴壁细胞，配合能解决顽固型支原体或者使用 Myco-3 处理停用后又出现支原体污染的情况 |
100 倍稀释加入培养基，与 Myco-2 配合使用。使用 Myco-1 处理 4 天后换 Myco-2 处理 3 天，如此重复 2-3 次即可 |
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Myco-2 （货号 A5233） |
二甲胺四环素 |
二、AppliChem 细胞污染预防系列
有效保护细胞的最好方式是对于细胞培养环境的预防，如工作环境定期消毒处理，严格实验操作，保证器皿无菌等各方面。在实验室中，CO2 培养箱，CO2 培养箱水盘，水浴锅是非常重要的污染源。AppliChem 研发有系列污染预防系列产品专门针对这 3 大污染源，可有效预防真菌（及芽孢）、细菌、病毒等污染。使用方便，无腐蚀性，安全高效。
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名称 |
适用环境 |
预防微生物 |
使用斱法 |
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Incubator-Clean （货号 A5230） |
CO2 培养箱， 工作等台等 |
支原体，真菌及芽孢、细菌、病毒（包拪 HIV，HBV 等） |
即用型，喷雾处理完全湿润即可，无需转移出细胞，建议每 2 周处理一次 |
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Incuwater-Clean （货号 A5219） |
C02 培养箱水盘 |
支原体，真菌及芽孢、细菌、病 毒（包拪 HIV，HBV 等） |
100 倍稀释加入水盘灭菌水中，建议每 2-4 周更换灭菌水 |
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Aquabator-Clean （货号 A9390） |
水浴锅 |
细菌，真菌 |
100 倍稀释加入水浴锅，建议每 1-2 周吐水浴锅加入一次，每 4-6 周给水浴锅更换一次水 |
三、Applichem 支原体检测系列
传统的支原体检测方法包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、DNA 荧光染色检测以及 PCR 检测，除 PCR 检测方法以外，其他检测方法大多耗时长，要求检测人员具有丰富的经验，并且无法获得足够的灵敏度和特异性，对于一些稀有的支原体亚种无法有效检测。
AppliChem 设计的支原体检测试剂盒系列产品均是基于 PCR 方法，根据支原体 16S rRNA 保守序列设计引物，经过 PCR 反应扩增其 16S rRNA 片段，后采用琼脂糖电泳方法检测 270bp 条带。相对传统方法而言，具有强大优势：
- 高灵敏度：敏感度高达 100~1000CFU/ml，仅需 要 0.5 – 1.0 ml 细胞上清样本即可检测；
- 检测品种广泛：可检测常规品种，同时对于稀有 亚 种 也 能 同 效 检 测 ， 如 M. pneumoniae, Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis,M.bovis，几乎覆盖自然界 80 余个品种；
- 快速：操作时间只需 30 分钟，全程 5 个小时内 即可得到检测结果；
- 可靠：试剂盒中包括有阳性对照 DNA，可保证 实验结果的可重复性，减小因操作带来的误差；
- 安全性：无支原体培养过程，有效避免污染扩大。
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产品型号 |
检测方法 |
适用仪器 |
试剂盒组分 |
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PCR Mycoplasma Test Kit （货号 A3744） |
普通 PCR-电泳检测 |
普通 PCR 仪器 |
Reaction Mix Buffer Solution Positive Template Control |
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qPCR Mycoplasma Test Kit （货号 A9019） |
荧光定量 PCR |
LightCycler®1.2, 1.5, 2.0, 480, Rotor-Gene™ 3000, 6000, ABI Prism® 7000, iCycler iQ®, iQ™5, Opticon 2, Chromo 4, MX300P®, MX4000®. |
Primer/Probe/Nucleotide Mix(RED) Rehydration Buffer(BLUE) Positive Control DNA(GREEN) Internal Control DNA(YELLOW) PCR Grade Water(WHITE) |
上海金畔生物科技有限公司是PanReac Applichem 中国一级代理，为用户提供完善的技术支持与售后服务。如对产品感兴趣欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。