Amplite 荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。荧光胺本质上是非荧光性的，但是一旦与脂肪胺类（包括：多肽、蛋白质）反应便会产生一种带蓝绿色荧光的衍生物。Amplite荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒提供了一种在水溶液中对蛋白质进行定量检测的简单方法。它的荧光信号可以容易读出Ex/Em = 380 /470 nm。该Amplite 荧光胺蛋白质检测法可以便捷地用于96或384微孔板分析中，并且无需任何分步操作就可以容易地实现自动化。本检测法可以在30分钟内完成。用Amplite 荧光胺蛋白质检测试剂盒，可以检出少至3 ug/mL的BSA。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备荧光胺工作溶液（25μL）
2.添加BSA标准品或测试样品（75μL）
3.在室温下孵育5-30分钟
4.在Ex / Em = 380 / 470nm处读取荧光强度

溶液制备 

1.1标准溶液

BSA标准
通过进行1：2连续稀释，将适量的BSA标准品1 mg / mL（组分C）稀释到PBS中，以获得BSA标准品（BS7-BS1）的连续稀释液。

2.工作溶液

将DMSO（组分B）的全部内容物加入荧光胺（组分A）的瓶中，并充分混合。 注意：2.5 mL的荧光胺工作溶液足以用于1个平板。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中BSA标准品和测试样品的布局。 BS = BSA标准品（BS1-BS7,1.563至100μg/ mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备BSA标准品（BS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用30μL试剂代替75μL。

2.向BSA标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μL荧光胺工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入10μL荧光胺工作溶液，总体积为40μL/孔。

3.在室温下孵育反应5至30分钟，避光。

4.用Ex / Em = 380 / 470nm的荧光板读数器监测荧光增加。

参考文献

Covalent vaccination with Trypanosoma cruzi Tc24 induces catalytic antibody production
Authors: Sarah M Gunter, Leroy Versteeg, Kathryn M Jones, Keegan P Brian, Ulrich Strych, Maria Elena Bottazzi, Peter J Hotez, Eric L Brown
Journal: Parasite immunology (2018): e12585

Amplite 荧光法蛋白定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。蛋白质定量是蛋白质纯化，电泳，细胞生物学，分子生物学和其他研究应用中的重要任务。通常使用Biuret，Lowry，BCA和Bradford测定来估计蛋白质浓度。但是，这些比色测定法不太灵敏，并且需要大量样品以确保准确性。我们的Amplite 荧光蛋白定量试剂盒比现有的比色蛋白测量（例如Bradford和Bicinchoninic acid（BCA）测定）敏感得多。该试剂盒中使用的Prolite 橙在水溶液中不发荧光，但能快速与蛋白质反应并产生明亮的荧光。 Amplite 荧光蛋白定量试剂盒提供了一种定量分析溶液中蛋白质浓度的简单方法。只能检测到0.1μg/ mL的BSA。该试剂盒可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式进行。它可以在30分钟内完成，荧光信号易于在Ex / Em = 485/590 nm处监测。该试剂盒已被用于（1）研究蛋白质/蛋白质相互作用; （2）亲和层析后测量柱级分; （3）估计细胞提取物中膜蛋白的回收率;和（4）融合蛋白的高通量筛选。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法蛋白定量试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备Prolite 橙色工作溶液（50μL）
2.添加BSA标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30分钟
4.在Ex / Em = 485 / 590nm处读取荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
Protein Enhancer原液（500X）：
将100μL蛋白质增强缓冲液（组分E）加入到蛋白质增强剂（组分C）的小瓶中。 注意：20μL蛋白质增强剂原液（500X）足以制备10 mL工作溶液。 未使用的Protein Enhancer储备液（500X）应在-20 oC下以单次使用的等分试样储存。

2.标准溶液

BSA标准
注意：标准品和测试样品应在Protein Enhancer工作溶液中制备。

3.工作溶液

1.蛋白质增强剂工作溶液：
将20μL蛋白质增强剂储备溶液（500X）加入10 mL分析缓冲液（组分D）中并充分混合。

2. Prolite 橙色工作溶液：
将10μLProliteTM Orange（组分A）加入5mL测定缓冲液（组分D）中并充分混合。 注意：5 mL Prolite Orange工作溶液足以容纳1个平板。 为每个实验准备足够的Prolite 橙色工作溶液。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中BSA标准品和测试样品的布局。 BS = BSA标准（BS1-BS7）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

蛋白质分析

1.将50μLBSA标准品，空白对照和测试样品（参见表1和2）加入到实心黑色96孔板中。 注意：对于384孔板，添加20μL样品。

2.将50μL/孔的Prolite Orange工作溶液加入BSA标准品，空白对照和测试样品中，使总测定体积为100μL/孔。 注意：对于384孔板，在每个孔中加入20μLProlite Orange工作溶液。

3.将反应在37℃孵育10至30分钟，避光。

4.用Ex / Em = 485 / 590nm的荧光板读数器监测荧光增加。

参考文献

Dual Amplification Fluorescence Assay for Alpha Fetal Protein Utilizing Immunohybridization Chain Reaction and Metal-Enhanced Fluorescence of Carbon Nanodots
Authors: Xu, D. D.; Liu, C.; Li, C. Y.; Song, C. Y.; Kang, Y. F.; Qi, C. B.; Lin, Y.; Pang, D. W.; Tang, H. W.
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Quantification of Membrane Protein Self-Association with a High-Throughput Compatible Fluorescence Assay
Authors: Li, J.; Qiu, X. J.
Journal: Biochemistry (2017): 1951-1954

Use of anchor protein modules in fluorescence polarisation aptamer assay for ochratoxin A determination
Authors: Samokhvalov, A. V.; Safenkova, I. V.; Eremin, S. A.; Zherdev, A. V.; Dzantiev, B. B.
Journal: Anal Chim Acta (2017): 80-87

Tryptophan fluorescence quenching as a binding assay to monitor protein conformation changes in the membrane of intact mitochondria
Authors: Akbar, S. M.; Sreeramulu, K.; Sharma, H. C.
Journal: J Bioenerg Biomembr (2016): 241-7

Ag@SiO2-entrapped hydrogel microarray: a new platform for a metal-enhanced fluorescence-based protein assay
Authors: Jang, E.; Kim, M.; Koh, W. G.
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Label-free fluorescence assay for protein kinase based on peptide biomineralized gold nanoclusters as signal sensing probe
Authors: Song, W.; Wang, Y.; Liang, R. P.; Zhang, L.; Qiu, J. D.
Journal: Biosens Bioelectron (2015): 234-40

Budded baculoviruses as a tool for a homogeneous fluorescence anisotropy-based assay of ligand binding to G protein-coupled receptors: the case of melanocortin 4 receptors
Authors: Veiksina, S.; Kopanchuk, S.; Rinken, A.
Journal: Biochim Biophys Acta (2014): 372-81

Characterization of G protein-coupled receptors by a fluorescence-based calcium mobilization assay
Authors: Caers, J.; Peymen, K.; Suetens, N.; Temmerman, L.; Janssen, T.; Schoofs, L.; Beets, I.
Journal: J Vis Exp (2014): e51516

Cleavage of pro-tumor necrosis factor alpha by ADAM metallopeptidase domain 17: a fluorescence-based protease assay cleaves its natural protein substrate
Authors: Zhang, C.; Zheng, L.; Nurnberg, J.; Vacari, B. M.; Zhou, J.; Wang, Y.
Journal: Anal Biochem (2014): 14-9

A fluorescence-based thermal shift assay identifies inhibitors of mitogen activated protein kinase kinase 4
Authors: Krishna, S. N.; Luan, C. H.; Mishra, R. K.; Xu, L.; Scheidt, K. A.; Anderson, W. F.; Bergan, R. C.
Journal: PLoS One (2013): e81504

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