使用 dsGreen 染料进行 qPCR

使用 dsGreen 染料进行 qPCR

dsGreen 是一种非常灵敏的染料,用于检测双链 DNA (dsDNA)。两种染料均用于实时 qPCR 实验中扩增的非特异性检测。

  1. 如果 dsGreen 试剂储存温度低于 20 °С,请将其解冻并保存在室温下。为了快速解冻,可将试剂加热至 50 °С。

  2. 根据 PCR 试剂制造商的说明计算反应所需试剂的体积。请注意,dsGreen(库存 100х)必须在 PCR 主混合物中稀释至最高 1 倍浓度。

  3. 根据 PCR 试剂制造商的说明制备不含 DNA 的 1x 主混合物,添加必要量的 dsGreen。如果您使用不带热启动的 Taq 聚合酶,请将预混液和 PCR 管放在冰上。

  4. 将主混合物转移至管或板中并添加 DNA。

  5. 根据您的仪器制造商的说明继续进行放大。

笔记:

qPCR 实验中始终包含阳性和阴性对照。 qPCR 扩增的温度程序与给定模板和引物的标准 PCR 程序没有区别。对于检测,应使用 FAM 通道。为了能够区分特定产物和引物二聚体,请在 PCR 程序中使用熔解曲线步骤。

BrdU 细胞增殖检测试剂 CAS 59-14-3-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
BrdU 细胞增殖检测试剂 CAS 59-14-3价格 1095
产品规格

25 mg

产品货号

BrdU 细胞增殖检测试剂 CAS 59-14-3

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 307.09 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

BrdU 细胞增殖检测试剂是美国AAT生产的用于细胞增殖的产品,染料修饰的脱氧尿苷5′-三磷酸(例如氨基烯丙基dUTP)可用于通过常规酶促掺入方法(例如逆转录,切口平移,随机引物标记或PCR)产生含染料的DNA。该酶荧光标记方法广泛用于FISH探针和基于微阵列的实验。该TMR-dUTP缀合物可用作具有Spectrum Orange®过滤器组的橙色荧光颜色(Spectrum Orange®Vysis的商标)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的细胞增殖检测试剂/试剂盒。 

实验方案

用于染色细胞的样品方案

以下程序适用于大多数细胞类型。 生长培养基,细胞密度,其他细胞类型的存在和其他因素可能影响Brdu掺入。

 

1)制备1-10mM DMSO储备溶液。 如果储存在-20°C,DMSO储备液可以保存6个月。

2)通过离心沉淀细胞并将细胞重悬于完全生长培养基中。 培养物中的贴壁细胞可以在盖玻片上或细胞培养孔中原位染色。

3)使用5和20μM之间的浓度添加Brdu染色并孵育60分钟过夜作为指导。 最佳孵育时间取决于细胞类型和实验目标。

4)用70-80%酒精或酸 – 乙醇固定细胞20-30分钟。

5)用PBS洗涤(3次,每次2分钟)。

6)继续进行免疫细胞化学染色技术。

 

参考文献

 

DNA interstrand crosslinks are induced in cells prelabelled with 5-bromo-2′-deoxyuridine and exposed to UVC radiation
Authors: Wojcik A, Bochenek A, Lankoff A, Lisowska H, Padjas A, Szumiel I, von Sonntag C, Obe G.
Journal: J Photochem Photobiol B (2006): 15
 
Estrogen-induced region specific decrease in the density of 5-bromo-2-deoxyuridine-labeled cells in the olfactory bulb of adult female rats
Authors: Hoyk Z, Varga C, Parducz A.
Journal: Neuroscience (2006): 1919
 
Sequence-dependent formation of intrastrand crosslink products from the UVB irradiation of duplex DNA containing a 5-bromo-2′-deoxyuridine or 5-bromo-2′-deoxycytidine
Authors: Zeng Y, Wang Y.
Journal: Nucleic Acids Res. (2006)
 
Exposure to 5-bromo-2′-deoxyuridine induces oxidative stress and activator protein-1 DNA binding activity in the embryo
Authors: Sahambi SK, Hales BF.
Journal: Birth Defects Res A Clin Mol Teratol (2006): 580
 
The evaluation of early embryonic neurogenesis after exposure to the genotoxic agent 5-bromo-2′-deoxyuridine in mice
Authors: Kuwagata M, Ogawa T, Nagata T, Shioda S.
Journal: Neurotoxicology. (2006)
 
Flow cytometric method for enumeration and characterization of newly released polymorphonuclear leukocytes from the bone marrow using 5′-bromo-2′-deoxyuridine
Authors: Shih CH, Whalen BA, Goto Y, Hogg JC, van Eeden SF.
Journal: Am J Physiol Cell Physiol (2005): C757
 
5-Bromo-2′-deoxyuridine is selectively toxic to neuronal precursors in vitro
Authors: Caldwell MA, He X, Svendsen CN.
Journal: Eur J Neurosci (2005): 2965
 
Discrimination of cell nuclei in early S-phase, mid-to-late S-phase, and G(2)/M-phase by sequential administration of 5-bromo-2′-deoxyuridine and 5-chloro-2′-deoxyuridine
Authors: Yamada K, Semba R, Ding X, Ma N, Nagahama M.
Journal: J Histochem Cytochem (2005): 1365
 
Neuropathological examination of fetal rat brain in the 5-bromo-2′-deoxyuridine-induced neurodevelopmental disorder model
Authors: Ogawa T, Kuwagata M, Muneoka KT, Shioda S.
Journal: Congenit Anom (Kyoto) (2005): 14
 
Locomotor hyperactivity following prenatal exposure to 5-bromo-2′-deoxyuridine: neurochemical and behavioral evidence of dopaminergic and serotonergic alterations
Authors: Kuwagata M, Muneoka KT, Ogawa T, Takigawa M, Nagao T.
Journal: Toxicol Lett (2004): 63

iFluor 488 胺-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
iFluor 488 胺价格 2823
产品规格

1 mg

产品货号

iFluor 488 胺

产品参数
Ex (nm) 491 Em (nm) 516
分子量 805.61 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称:iFluor 488 胺

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:805.61

溶剂:DMSO

激发波长(nm):491

发射波长(nm):516

 

产品介绍

iFluor 488 胺是美国AAT Bioquest生产的iFluor系列荧光染料。AAT Bioquest的iFluor 染料经过优化,可用于标记蛋白质,特别是抗体。这些染料是明亮的,光稳定的并且对蛋白质具有小的猝灭。荧光仪器的主要激光线(例如,350,405,488,555和633nm)可以很好地激发它们。iFluor 488染料的荧光激发和发射大值分别为~491 nm和~516 nm。这些光谱特性使其成为AlexaFluor®488标记染料的优异替代品(AlexaFluor®是Invitrogen的商标)。iFluor 488胺是稳定的并且用于修饰羰基(例如醛和羧基)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的iFluor 488 胺。 

点击查看光谱

  • AAT Bioquest iFluor 染料干货锦集 你想了解的都在这里
  • 锦囊:iFluor 系列染料大集合

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

 

相关产品

产品名称 货号
iFluor 488琥珀酰亚胺酯 Cat#1023
iFluor 488酰肼 Cat#1082
iFluor 488马来酰亚胺 Cat#1062

抗体验证的优越策略:封闭肽验证

抗体验证的优越策略:封闭肽验证

据报道,每年因劣质抗体造成的生物和医学研究损失约为8亿美元。此外,实验结果不一致和抗体重复性差的后果 是无法估计的。

国际抗体验证工作组(IWGAV)于2016年9月发表题为《 自然方法 中 抗体验证的建议》的文章 ,强调抗体验证应根据目标蛋白的相应应用和背景进行。作者提出了抗体验证的五个概念支柱:(i)遗传策略,(ii)正交策略,(iii)独立抗体策略,(iv)标记蛋白的表达,以及(v)免疫捕获后进行质谱分析。多发性硬化症)。

 

这五种方法各有其优缺点以及适用条件。例如,遗传策略通过比较细胞或组织中的相关信号来评估抗体特异性,其中使用 CRISPR-Cas9 或 RNA 干扰 (RNAi) 敲除或敲低目标基因与野生型 (WT) 对照的信号。尽管这种方法很简单,但未能击倒或敲除目标基因将大大损害该方法的实验可行性。

 

免疫捕获后进行质谱 (MS) 的方法可以识别与纯化抗体直接相互作用的蛋白质, 以及与目标蛋白质间接相互作用的其他蛋白质。 然而,这种方法依赖于昂贵的科学仪器和实验材料。并非每个实验室都能负担得起这些设备。

 

在 Affinity Biotech,抗体通过 独立抗体验证进行验证。为此,使用几种抗体来识别靶蛋白上的不同表位。具有最高特异性的抗体是通过包括比较和定量分析的适当程序确定的。虽然大多数抗体的检测应该没有问题,但对于检测特异性要求较高的抗体,特别是那些位点特异性的磷酸化抗体,仍然不够。

 

结合多年的抗体研发和生产经验,Affinity Biotech采用了更合适的抗体验证策略: 封闭 肽验证

 

封闭肽(抗原)与抗体一一对应。 。这是最原始的材料,只有原厂才能提供。

抗体验证的优越策略:封闭肽验证

首先,我们对封闭肽进行 MS 分析,以确保肽序列准确。

在蛋白质印迹分析中,肽会阻断目标抗体的信号。没有封闭肽的泳道用作对照。封闭肽将与靶蛋白竞争结合位点,从而在封闭基团中不留下特异性条带。

 

该策略目前用于验证我们的抗体。它对于磷抗体的生产至关重要,因为它确保了磷抗体的位点特异性。换句话说,磷酸化抗体只能识别相应位点的磷酸化靶蛋白。非磷酸化的目标蛋白或其他位点磷酸化的目标蛋白将不会被识别。

举个例子。在 Phospho-MSK1 (Ser211) Antibody(货号 AF7155)的蛋白质印迹验证中,泳道 1 和泳道 3 中分别添加了非磷酸化阻断肽和磷酸化阻断肽。 2号车道没有被封闭。结果显示,使用磷酸化肽封闭目标蛋白后,没有检测到目的条带。

抗体验证的优越策略:封闭肽验证


N6-甲基腺苷-生物素缀合物-AAT Bioquest荧光染料

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N6-甲基腺苷-生物素缀合物价格 4245
产品规格

1 mg

产品货号

N6-甲基腺苷-生物素缀合物

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 753.87 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称:N6-甲基腺苷-生物素缀合物

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:753.87

外观:固体

溶剂:DMSO

 

产品介绍

N-6甲基腺苷(m6A)是目前已知的100余种RNA甲基化修饰中普遍存在的一种,存在于某些病毒和大多数真核生物中,包括哺乳动物,昆虫,植物和酵母。 在tRNA,rRNA和小核RNA(snRNA)以及一些长的非编码RNA(例如Xist)中也发现了它。 腺苷的甲基化由包含METTL3作为SAM结合亚基的大型N6-甲基腺苷甲基转移酶复合物控制。 m6A的生物学功能是通过一组RNA结合蛋白介导的,这些蛋白特异性识别RNA上的甲基化腺苷。 该生物素化的N6-甲基腺苷衍生物可以用于检测与N6-甲基腺苷有关的RNA修饰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的N6-甲基腺苷-生物素缀合物。 

 
参考文献
 
Changes of RNA N(6)-methyladenosine in the hormesis effect induced by arsenite on human keratinocyte cells
Authors: Chen, H., Zhao, T., Sun, D., Wu, M., Zhang, Z.
Journal: Toxicol In Vitro (2019): 84-92
 
N6-methyladenosine demethylase FTO suppresses clear cell renal cell carcinoma through a novel FTO-PGC-1alpha signalling axis
Authors: Zhuang, C., Zhuang, C., Luo, X., Huang, X., Yao, L., Li, J., Li, Y., Xiong, T., Ye, J., Zhang, F., Gui, Y.
Journal: J Cell Mol Med (2019): 2163-2173
 
A dynamic reversible RNA N(6) -methyladenosine modification: current status and perspectives
Authors: Bi, Z., Liu, Y., Zhao, Y., Yao, Y., Wu, R., Liu, Q., Wang, Y., Wang, X.
Journal: J Cell Physiol (2019): 7948-7956
 
Transcriptome-wide analysis of N6-methyladenosine uncovers its regulatory role in gene expression in the lepidopteran Bombyx mori
Authors: Li, B., Wang, X., Li, Z., Lu, C., Zhang, Q., Chang, L., Li, W., Cheng, T., Xia, Q., Zhao, P.
Journal: Insect Mol Biol (2019): se name=”17100.enl” path=”C:UsersaatbiDrop
 
RNA N6-methyladenosine modification participates in miR-660/E2F3 axis-mediated inhibition of cell proliferation in gastric cancer
Authors: He, X., Shu, Y.
Journal: Pathol Res Pract (2019): se name=”17100.enl” path=”C:UsersaatbiDrop
 
Importance of m N(6)-methyladenosine (m(6)A) RNA modification in cancer
Authors: Tuncel, G., Kalkan, R.
Journal: Med Oncol (2019): 36
 
The role of N(6)-methyladenosine RNA methylation in the heat stress response of sheep (Ovis aries)
Authors: Lu, Z., Ma, Y., Li, Q., Liu, E., Jin, M., Zhang, L., Wei, C.
Journal: Cell Stress Chaperones (2019): 333-342
 
Epitranscriptomics: Correlation of N6-methyladenosine RNA methylation and pathway dysregulation in the hippocampus of HIV transgenic rats
Authors: Fu, Y., Zorman, B., Sumazin, P., Sanna, P. P., Repunte-Canonigo, V.
Journal: PLoS One (2019): e0203566
 
Identifying N(6)-methyladenosine sites using extreme gradient boosting system optimized by particle swarm optimizer
Authors: Zhao, X., Zhang, Y., Ning, Q., Zhang, H., Ji, J., Yin, M.
Journal: J Theor Biol (2019): 39-47
 
N1-Methyladenosine detection with CRISPR-Cas13a/C2c2
Authors: Chen, Y., Yang, S., Peng, S., Li, W., Wu, F., Yao, Q., Wang, F., Weng, X., Zhou, X.
Journal: Chem Sci (2019): 2975-2979

使用荧光核酸染色剂 LUCS 13 对活细胞进行染色

使用荧光核酸染色剂 LUCS 13 对活细胞进行染色

LUCS 13 是一种可渗透细胞的核酸染料,在与核酸结合后呈现绿色荧光。该染料具有高荧光产量,且结构与 SYTO™13 染料相同。

LUCS 13 用于对活的和死的真核细胞以及革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中的 DNA 和 RNA 进行染色。染料被 488 nm 的蓝色激光激发。其荧光发射在荧光素通道中检测到,与 DNA 结合时峰值为 509 nm,与 RNA 结合时峰值为 514 nm。

该染料可用于同时标记细胞不可渗透的核标记物(例如 YoDi-3),以使用荧光显微镜和流式细胞术评估细胞活力。

协议

确切的方案取决于具体的细胞类型和实验任务。一般来说,可以描述如下:

  1. 准备 50 µM LUCS 13 储备溶液。为此,将 990 µl 去离子水添加到 10 µl 5 mM LUCS 13 溶液中。储备液可以等分并冷冻以供长期储存。

  2. 要制备 1 µM LUCS 13 工作溶液,请将 20 µl 50 µM LUCS13 库存添加到 980 µl PBS 中。

  3. 以合适的方式小心地从生长表面去除贴壁细胞。对于悬浮细胞,从下一点开始工作。

  4. 用冷 PBS(pH 7.4)清洗细胞一次。 300 g离心 5 分钟获得种子细胞

  5. 将细胞在 1 ml 1 μM LUCS 13 工作溶液中于 37°C 孵育 30 分钟。

  6. 300 g离心 5 分钟去除染料溶液

  7. 用 PBS 清洗细胞一次。

  8. (可选)如有必要,可以将细胞在含 3.7% 甲醛的 PBS 中固定 15 分钟,用 PBS 洗涤,然后用另一种染色剂重新染色。

重要的

  • 处理 LUCS 13 溶液时请使用塑料瓶,因为稀释的染料可能会粘在玻璃上。

  • 使用无磷酸盐缓冲液(例如盐水中的 15 mM HEPES)可获得更明亮的染色结果。

  • 在开始实验之前,测试几种染料浓度范围从 10 nM 到 5 µM,以确定最佳的染料稀释度。染色结果受许多因素影响:生长培养基、细胞密度、其他细胞类型的存在、染色持续时间等。

美国PALL过滤器PVDF亲水性膜Acrodisc针头过滤器 4450 4406 4452

 美国PALL过滤器PVDF亲水性膜Acrodisc针头过滤器 4450 4406 4452
产品编号:
72814211016
产品名称:
美国PALL过滤器PVDF亲水性膜Acrodisc针头过滤器 4450 4406 4452
规  格:
产品备注:
产品类别:
美国颇尔PALL滤膜滤器
   产 品 说 明
PVDF膜Acrodisc针头过滤器和FPVericel(PVDF)圆盘过滤膜片
与众多溶剂兼容的亲水性膜
● 可用于众多过滤场合,包括基于溶剂的腐蚀性和非腐蚀性流动相。
● 减少实验变量。HPLC认证,紫外线吸收萃取物水平低。
● 避免柱子和仪表的颗粒聚结。
● 带有Minispilce出口的13mm Acrodisc针头过滤器提供低残留量,易于过滤到自动取样器小瓶中。

针头过滤器应用

● 提供极佳的化学兼容性,即使是腐蚀性酸和酒精。
● 不推荐用于丙酮、DM 、DMSO 、盐基> 6N 。
● AutoPack包装的AcrodiscPSF针头过滤器与Caliper . Prelude 、TPWll , Multi 一Dose令系统及Sotax令溶液系统的自动化进样工作站兼容。

订货信息:

PVDF 膜Acrodisc®针头过滤器,13mm
产品编号
说明
包装
4450
0.2µm minispilce出口 3×100个/包
300个/盒
4544
0.2µm minispilce出口
1000个/包装
4452
0.45µm minispilce出口 3×100个/包
300个/盒
4545
0.45µm minispilce出口
1000个/包装
PVDF 膜Acrodisc 针头过滤器,13mm
产品编号
说明
包装
4455
0.2µm阳螺纹滑动Luer 出口3x10o 个/包
300 个/盒
4457
0.45µm阳螺纹滑动Luer 出口3×100个/包
300 个/盒
PVDF 膜Acrodisc 针头过滤器,25mm
产品编号
说明
包装
4406
0.2µm 4×50个/包
200个/盒
4520
0.2µm
1000个/包装
4519
0.45µm autopack™标准包装 8×25个/包
200个/盒
4408
0.45µm 4×50个/包
200个/盒
4500
0.45µm
1000个/盒
PVDF 膜Acrodisc PSF针头过滤器,25mm
产品编号
说明
包装
AP-4519
0.45µm autopack™标准包装 8×25个/包
25个/包装200个/盒
AP-4408
0.45µm 4×50个/包
200个/盒
AP-4500
0.45µm
1000个/包装
PVDF 膜Acrodisc PSF GxF针头过滤器,25mm
产品编号
说明
包装
AP-4309
GxF/0.45µm autopack标准包装 8×25个/包
200个/盒
AP-4310
GxF/0.45µm 4×50个/包
200个/盒
AP-4308
GxF/0.45µm
1000个/包装
FP Vericel ™ ( PVDF )圆盘过滤膜片,0 . 2µm
产品编号
说明
包装
66475
13mm
100个/包装
66476
25mm
100个/包装
66477
47mm
100个/包装
FP Vericel ( PVDF )圆盘过滤膜片,0 . 45µm
产品编号
说明
包装
66478
13mm
100个/包装
66479
25mm
100个/包装
66480
47mm
100个/包装
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Affinity 的 AFfirm™ mAb的优势是什么?

Affinity 的 AFfirm™ mAb的优势是什么?

1 AFfirm™ 小鼠单克隆抗体家族由特定肽抗原产生。相比市面上80%的重组蛋白抗原具有显着优势:

1.1.特异性高度保证,识别蛋白的位置更加明确。

Affinity 的 AFfirm™ mAb的优势是什么?

红色部分是识别表位,如图所示。


1.2 抗体识别表位与靶蛋白同源性预测信息更丰富 

Affinity 的 AFfirm™ mAb的优势是什么?


1.3 与费时费力的抗体表位测定相比(目前全球范围内用于测定抗原表位的鼠单克隆抗体品种不足300种。从某种意义上说,市面上的鼠单克隆抗体不知道识别蛋白质的确切位置),AFfirm 家族单克隆抗体天生具有清晰的表位识别能力。 


2 基于流式分选技术,我们能够筛选对 AFfirm™ 单克隆抗体家族具有最高亲和力的单克隆细胞系。这可以比传统的小鼠单克隆抗体(稀释1:10,000,10s)高10-50倍。

Affinity 的 AFfirm™ mAb的优势是什么?

AFfirm家族单克隆抗体的研发周期显着缩短。传统的单克隆筛选步骤繁琐乏味,多个亚克隆又费时又费力。利用流式分选的高通量,筛选一盘96孔单克隆细胞仅需1分钟,大大提高了效率。

4 内源性 WB 已被用作全系列 AFfirm™ 单克隆抗体的资格标准。与过表达和重组蛋白样品相比,内源检测是好标准。


5 全系列 AFfirm™ 抗体均采用定制组件,提供 mg 级和 g 级。


iFluor 555 胺-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
iFluor 555 胺价格 2823
产品规格

1 mg

产品货号

iFluor 555 胺

产品参数
Ex (nm) 557 Em (nm) 570
分子量 867.88 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称:iFluor 555 胺

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:867.88

溶剂:DMSO

激发波长(nm):556

发射波长(nm):569

 

产品介绍

iFluor 555 胺是美国AAT Bioquest生产的iFluor系列荧光染料。AAT Bioquest的iFluor 染料经过优化,可用于标记蛋白质,特别是抗体。这些染料是明亮的,光稳定的并且对蛋白质具有小的猝灭。荧光仪器的主要激光线(例如,350,405,488,555和633nm)可以很好地激发它们。 iFluor 555染料的荧光激发和发射大值分别为~550nm和~570nm。 iFluor 555系列的光谱特性基本上与Cy3®相同(Cy3®是GE Healthcare的商标)。与Cy3探针相比,iFluor 555家族具有更强的荧光和更高的光稳定性。它们的荧光与pH值无关,pH值为3至11.这些光谱特性使这种新型染料系列成为Cy3®的优良替代品。 iFluor 555系列已成为Cy3®和AlexaFluor®555标记染料(Cy3®和AlexaFluor®是Invitrogen和GE Health Care的商标)的绝佳替代品。 iFluor 555胺是稳定的并且用于修饰羰基(例如醛和羧基)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的iFluor 555 胺。 

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  • 锦囊:iFluor 系列染料大集合

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

 

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KLHL26 Polyclonal Antibody-Invitrogen

  • 详细信息
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  • 相关实验
  • 货号: PA568644
    抗体名: KLHL26 Polyclonal Antibody
    靶点: KLHL26
    应用范围: Western Blot
    宿主: Rabbit
    适应物种: Bovine, Canine, Equine, Guinea Pig, Human, Mouse, Rabbit, Rat
    克隆性: 单克隆
    保存条件: -20° C, Avoid Freeze/Thaw Cycles
    形态: Liquid
    亚型: IgG
    免疫原: synthetic peptide directed towards the N-terminal region of mouse KLHL26
    规格: 100 µl

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使用 LumiZol 试剂快速分离 RNA、DNA 和蛋白质

使用 LumiZol 试剂快速分离 RNA、DNA 和蛋白质

LumiZol Reagent 设计用于从各种来源(植物、动物、细菌和酵母)的细胞和组织样品中快速分离 RNA、DNA 和蛋白质。 LumiZol Reagent 是一种含有苯酚、异硫氰酸胍以及分离高质量核酸和蛋白质所需的其他成分的溶液。苯酚和异硫氰酸胍可裂解细胞并有效抑制核糖核酸酶,从而保持 RNA 完整。均质化并添加氯仿后,样品分离成上层水相、中间相和下层有机相。 RNA 可以用异丙醇从上相沉淀,而 DNA 和蛋白质可以分别用乙醇和异丙醇从中间相和下层有机相沉淀。

用于 RNA、DNA 和蛋白质分离的样品:

  • 植物和动物组织——30-100毫克;

  • 贴壁真核细胞 — 1×10 5至 1×10<sup7< sup=”” style=”box-sizing: border-box;”>;

  • 悬浮真核细胞、酵母 — 5×10 6至 10×10 6

  • 细菌细胞 — 1×10 7

RNA分离

使用新鲜或液氮速冻样品以获得最佳 RNA 分离效果。在 LumiZol 试剂中均质化之前,请勿解冻样品。

  1. 根据您的起始材料在 LumiZol 试剂中裂解样品:

    • 组织:在 1 mL LumiZol 试剂中匀浆组织样本,并将匀浆转移至新的 1.5 mL 管中。

    • 细胞:弃去培养基,用 0.5–1 mL LumiZol 试剂重悬细胞沉淀或单层细胞,然后将裂解物转移至新的 1.5 mL 试管中。

  2. (可选)如果样品脂肪含量高,则将裂解液在 4 °C 下以 12,000 × g 离心 5 分钟,然后将上清液转移至新的 1.5 mL 管中。

  3. 将管在室温下孵育 5 分钟。

  4. 向裂解液中添加 0.2 mL 氯仿(每 1 mL 用于裂解的 LumiZol 试剂),通过翻转管充分混合,并在室温下孵育 2 分钟。

  5. 将管在 4°C 下以 12,000 × g 离心 15 分钟。离心后,混合物分成两相:无色水相和黄色有机相,其间有中间相。

  6. 将上层水相转移至新的 1.5 mL 管中,不要接触间相。如果样品中RNA的量非常少,则在水相中添加共沉淀剂。保留有机相和界面用于 DNA 和蛋白质提取。

  7. 向水相中加入0.8体积的异丙醇,充分混合,并在室温下孵育10分钟。

  8. 将管在 4°C 下以 12,000 × g 离心 10 分钟。

  9. 弃去上清液,向 RNA 沉淀中加入 1 mL 70% 乙醇,充分混匀,并在 4 °C 下以 7,500 × g离心管 5 分钟。

  10. 弃去上清液,将 RNA 沉淀风干 5-10 分钟。

  11. 将 RNA 沉淀溶解在 50–100 μL 无 RNase 水中。

DNA分离

  1. 除去“RNA 分离”部分步骤 5 中获得的界面上的任何剩余水相。

  2. 向界面相和有机相中添加 0.3 mL 100% 乙醇(每 1 mL 《RNA 分离》步骤 1 中使用的 LumiZol 试剂),通过翻转管混合,并在室温下孵育 2-3 分钟。

  3. 将管在 4 °C 下以 2,000 × g 离心 5 分钟。将上清液转移至新的 1.5 mL 管中。上清液可用于后续的蛋白质提取。

  4. 将 DNA 沉淀重悬于 1 mL 柠檬酸钠/乙醇溶液(10% 乙醇中的 0.1 M 柠檬酸钠,pH 8.5)中。

  5. 孵育 30 分钟,偶尔混合。

  6. 将管在 4 °C 下以 2,000 × g 离心 5 分钟。丢弃上清液。

  7. 再重复一次步骤 4-6。

  8. 将 1 mL 70% 乙醇添加到 DNA 沉淀中,充分混匀,然后在 4 °C 下以 2,000 × g离心管 5 分钟。

  9. 弃去上清液,将 DNA 沉淀风干 5-10 分钟。

  10. 将 DNA 沉淀重悬于 0.3–0.6 mL 的 8 mM 氢氧化钠中。

  11. 将管在 4 °C 下以 12,000 × g 离心 10 分钟,将上清液转移至新的 1.5 mL 管中,并用 Tris-HCl 缓冲液将 pH 调节至 7–8 [添加 5 μL 1 M Tris-HCl 缓冲液(pH 4.5)至300μL DNA溶液]。

蛋白质分离

  1. 向《DNA 分离》部分第 3 步获得的上清液中添加 1.5 mL 异丙醇(每 1 mL 《RNA 分离》步骤 1 中使用的 LumiZol 试剂),通过翻转管充分混合,并孵育 10分钟在室温下。

  2. 将管在 4°C 下以 12,000 × g 离心 10 分钟。丢弃上清液。

  3. 将蛋白质沉淀重新悬浮在 2 mL 盐酸胍/乙醇溶液(0.3 M 盐酸胍于 95% 乙醇中)中。

  4. 将管在室温下孵育 20 分钟。

  5. 将管在 4 °C 下以 7,500 × g 离心 5 分钟。丢弃上清液。

  6. 再重复步骤 3-5 两次。

  7. 向蛋白沉淀中加入 2 mL 100% 乙醇,充分混匀,室温孵育 20 分钟。

  8. 将管在 4 °C 下以 7,500 × g 离心 5 分钟。丢弃上清液。

  9. 将蛋白质沉淀风干 5-10 分钟。

  10. 将蛋白质沉淀溶解在含有 SDS 的缓冲液中(例如,用于将蛋白质样品加载到聚丙烯酰胺凝胶上的样品缓冲液)。

7-AAD(7-氨基放线菌素D)CAS 7240-37-1-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
7-AAD(7-氨基放线菌素D)CAS 7240-37-1价格 1095
产品规格

1 mg

产品货号

7-AAD(7-氨基放线菌素D)CAS 7240-37-1

产品参数
Ex (nm) 549 Em (nm) 648
分子量 1270.43 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

7-AAD 7-氨基放线菌素 D是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞凋亡的试剂,7-氨基放线菌素D(7-AAD)是一种非渗透性染料,可用于鉴定死细胞。染料可以进入具有受损质膜或受损/无细胞代谢的细胞。 一旦进入细胞内,染料与细胞内DNA结合,产生高度荧光的结合物,这些结合物将细胞鉴定为无活力。 它广泛用于流式细胞术。 7-AAD可以被488nm激光氩激光线激发,荧光检测到650nm以上。 尽管7-AAD的发射强度低于碘化丙锭(PI),但由于光谱重叠小,因此与其他488 nm激发的荧光染料(如FITC和PE)相结合,更长的发射波长使其更适用于多重测定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的细胞凋亡检测试剂/试剂盒。 

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实验方案

染色细胞分析方案

        通常7-AAD染色的染色在细胞染色的后一步,并且它只能染死细胞。 以下程序适用于大多数细胞类型。 生长培养基,细胞密度,细胞类型和其他因素可能会影响染色。玻璃器皿上的残留洗涤剂也可能影响许多生物的染色,导致在没有细胞存在的溶液中出现明亮染色的物质。

1)制备1-10mM DMSO储备溶液。如果储存在-20°C,DMSO储备液可以保存6个月。

2)使用适合您样品的固定方案。

3)通过离心沉淀细胞,并将细胞重悬于缓冲盐溶液或培养基中,在pH 7.4下进行佳染料染色。 培养物中的贴壁细胞可以在盖玻片上或细胞培养孔中原位染色。

4)使用0.5至5μM的浓度添加7-AAD染色,并将其孵育15至60分钟。

注意:在初的实验中,好在整个建议的范围内尝试几种染料浓度,以确定产生佳染色的浓度。

5)在Ex / Em = 545 / 650nm处测量荧光强度(使用FL3进行流式细胞分析)

注意:7-AAD是一种潜在的致癌物质。 建议用户戴上手套,防护服和眼睛/面部保护装置,以免接触皮肤和眼睛。

 

参考文献

Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

iFluor 647 胺-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
iFluor 647 胺价格 2823
产品规格

1 mg

产品货号

iFluor 647 胺

产品参数
Ex (nm) 656 Em (nm) 670
分子量 1021.03 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称:iFluor 647 胺

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:1021.03

溶剂:DMSO

激发波长(nm):654

发射波长(nm):669

 

产品介绍

iFluor 647 胺是美国AAT Bioquest生产的iFluor系列荧光染料。AAT Bioquest的iFluor 染料经过优化,可用于标记蛋白质,特别是抗体。 这些染料是明亮的,光稳定的并且对蛋白质具有小的猝灭。 荧光仪器的主要激光线(例如,350,405,488,555和633nm)可以很好地激发它们。 iFluor 555染料的荧光激发和发射大值分别为~550nm和~570nm。 iFluor 647系列的光谱特性基本上与Cy5®相同(Cy5®是GE Healthcare的商标)。 与Cy5探针相比,iFluor 647系列具有更强的荧光和更高的光稳定性。 它们的荧光与pH值无关,从pH 3到11.这些光谱特性使这种新染料系列成为Cy5®和AlexaFluor®647(Cy5®和AlexaFluor®是Invitrogen和GE Health Care的商标)的绝佳替代品。 iFluor 647胺是稳定的并且用于修饰羰基(例如醛和羧基)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的iFluor 647 胺。 

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  • AAT Bioquest iFluor 染料干货锦集 你想了解的都在这里
  • 锦囊:iFluor 系列染料大集合

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

 

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Signosis:细胞因子 ELISA 试剂盒介绍

Signosis:细胞因子 ELISA 试剂盒介绍

细胞因子和生长因子是信号分子,在细胞生长、分化、基因表达、迁移、免疫和炎症等许多生物过程中发挥关键作用。这些信号的破坏可能导致多种疾病,包括关节炎、肝病、炎症性肠病、心脏相关疾病和癌症。 Signosis 提供了多种工具来分析一种特定的细胞因子或生长因子,或同时监测多种细胞因子或生长因子。

原则:

在此测定中,测试样品最初与固相捕获抗体反应,导致细胞因子与孔结合。然后清洗孔以去除未结合的蛋白质,并添加生物素连接的抗体以与细胞因子结合。洗去未结合的抗体后,添加链霉亲和素-HRP 缀合物,与抗体结合的细胞因子形成复合物。

对于比色试剂盒,添加 HRP 底物 TMB,当检测到 HRP 连接抗体时,TMB 会形成蓝色。然后用终止溶液终止反应,颜色从蓝色变为黄色。每孔中的细胞因子浓度与其颜色强度成正比,可以通过在酶标仪中测量其 450 nm (OD450) 的光密度来定量。

对于化学发光试剂盒,用 HRP 发光底物检测板。发光在微孔板发光计上以相对光单位 (RLU) 报告。每种特定细胞因子的表达水平与发光强度成正比。

Signosis:细胞因子 ELISA 试剂盒介绍

比色 ELISA 图

长处:

高品质和竞争力的价格。

可以同时分析多个样品。

一对针对特定细胞因子的高选择性抗体。全部集成在一个带有预涂层 96 孔板的系统中。

该检测适用于任何生物液体材料和细胞裂解液,例如血清、脑脊液 (CSF)、尿液和组织匀浆。

大鼠细胞因子 ELISA 试剂盒