Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测乳酸的试剂盒，乳酸是手性的并且具有两种光学异构体：L-乳酸和D-乳酸。在代谢和运动过程中，乳酸盐通过乳酸脱氢酶（LDH）不断从丙酮酸产生。 监测乳酸水平是评估组织需氧量和利用率之间平衡的好方法，在研究细胞和动物生理学时非常有用。D-乳酸不被哺乳动物代谢，其从体内主要取决于肾脏排泄。D-和L-乳酸存在于许多发酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制肉类和鱼类。D-和L-乳酸含量是食品的质量指标，如鸡蛋，牛奶，果汁和葡萄酒。血液中异常高浓度的D-乳酸通常是胃肠道中过度生长的反映。

AAT Bioquest的Amplite 乳酸盐检测试剂盒（L＃乳酸检测Cat＃13814和13815，D-lactate检测Cat＃13810和13811）提供荧光和吸光度检测方法，用于检测L-乳酸盐或D-乳酸盐。生物样品，如血清，血浆，尿液，以及细胞培养样品。在酶偶联测定中，乳酸与NADH成比例相关，其通过生色NADH传感器特异性监测。通过吸光度酶标仪在~575nm或~55075nm / A605nm的吸光度比下可以容易地读取信号，以提高测定灵敏度。使用此Colorimetric Amplite L-乳酸测定试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测到低至4μM的L-乳酸。它应用广泛，可以很容易地适用于需要测量L-乳酸的各种应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒。

适用仪器

96孔板测定示例

概述

制备L-乳酸测定混合物（50μL）

加入L-乳酸标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作方法

1.准备NAD储备溶液（100X）：

向NAD小瓶（组分C）中加入100μLH2O，制成100×NAD储备溶液。

2.准备L-乳酸盐储备液：

将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入L-乳酸盐标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：未使用的L-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备L-乳酸标准品（0至1 mM）的连续稀释液：

3.1将10μLL-乳酸盐储备液（来自步骤2）加入990L PBS缓冲液中，以产生1mM L-乳酸盐标准溶液。

注意：稀释的L-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1mM L-乳酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到L-Lactate标准品的300,100,30,10,3,1和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2中所述，将L-乳酸盐标准品和含L-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微孔板中。

4.制备L-乳酸测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶探针（组分A）中。

4.2将50μLNAD储备溶液（100X，来自步骤1）加入到组分A的瓶子中（来自步骤4.1），并充分混合。

注意：这种L-乳酸盐测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的L-乳酸盐测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

5.运行L-乳酸测定：

5.1将50μLL-乳酸盐测定混合物（来自步骤4.2）添加至L-乳酸盐标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3.3）的每个孔中以使得总L-乳酸盐测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，在每个孔中加入25μL样品和25μLL-乳酸盐测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度读板仪检测吸光度比率的增加。

参考文献

Exploring the Probiotic and Compound Feed Fermentative Applications of Lactobacillus plantarum SK1305 Isolated from Korean Green Chili Pickled Pepper
Authors: Kai-Min Niu, Damini Kothari, Sang-Buem Cho, Sung-Gu Han, In-Geun Song, Sam-Churl Kim, Soo-Ki Kim
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Amplite 荧光法丙酮酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙酮酸的试剂盒，丙酮酸是细胞内代谢途径中的重要化合物。它来源于称为糖酵解的葡萄糖代谢。一分子葡萄糖分解成两个丙酮酸分子，通过两种方式之一提供活细胞能量。当氧气存在时（有氧呼吸），丙酮酸被丙酮酸脱氢酶转化为乙酰-CoA，丙酮酸脱氢酶进入柠檬酸循环（也称为三羧酸循环）产生ATP。当氧气不足时，丙酮酸盐会厌氧分解，在动物体内产生乳酸盐，在植物和微生物体内产生乙醇。丙酮酸盐的异常水平或乳酸盐与丙酮酸盐的浓度比可能与肝脏疾病或代谢紊乱有关，并且是患者临床和其他实验室研究中的一种诊断测量。 AAT Bioquest的Amplite 比色丙酮酸测定试剂盒提供了一种灵敏的比色测定法，用于定量样品中的丙酮酸。它利用释放过氧化氢的酶偶联反应，可通过吸光度酶标仪在575 nm处通过丙酮酸盐传感器检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法丙酮酸检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品（50 µL）以及连续稀释的丙酮酸标准液（50 µL）
2.加入等体积的丙酮酸工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor 丙酮酸传感器（组分A）中，制成200X Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液。

1.2 丙酮酸标准溶液（1 mM）：
将10 µL 100 mM丙酮酸盐（组分D）添加到990 µL PBS（pH 7）中，得到1 mM丙酮酸盐溶液。

2.标准溶液

丙酮酸标准
将100 µL的1 mM丙酮酸标准溶液加入900 µL PBS中制成100 µM丙酮酸溶液（PS7）。 然后执行1：3连续稀释以获得连续稀释的丙酮酸标准品（PS6-PS1）。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合1瓶（组分B1）中； 混合均匀。

3.2 将100μLddH₂O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中； 混合均匀。

3.3 将整个小瓶（100μL）的Enzyme Mix 2和25 uL的200X Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中。 混合均匀。 注意：丙酮酸工作溶液不稳定，应立即使用，避免光照。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中丙酮酸标准品和测试样品的布局。 PS =丙酮酸标准溶液（PS1-PS7，0.1至100 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，将丙酮酸标准液（PS），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备成黑色的96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是50 µL。

2.在丙酮标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL丙酮酸工作溶液，使丙酮酸测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。 在6.5至7.0的pH值下运行丙酮酸盐测定。

3.将反应混合物在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止：570 nm）下监测荧光的增加。

参考文献

A replaceable dual-enzyme capillary microreactor using magnetic beads and its application for simultaneous detection of acetaldehyde and pyruvate
Authors: Shi J, Zhao W, Chen Y, Guo L, Yang L.
Journal: Electrophoresis (2012): 2145

Detection of inflammatory arthritis by using hyperpolarized 13C-pyruvate with MR imaging and spectroscopy
Authors: MacKenzie JD, Yen YF, Mayer D, Tropp JS, Hurd RE, Spielman DM.
Journal: Radiology (2011): 414

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Authors: Zhu A, Romero R, Petty HR.
Journal: Anal Biochem (2010): 123

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Authors: Wolff F, El Khattabi C, Bourdon F, Willems D.
Journal: Clin Biochem (2009): 1099

Faecal tumour pyruvate kinase M2: not a good marker for the detection of colorectal adenomas
Authors: Shastri YM, Stein JM.
Journal: Br J Cancer (2008): 1366; author reply 1367

Hyperpolarized 13C lactate, pyruvate, and alanine: noninvasive biomarkers for prostate cancer detection and grading
Authors: Albers MJ, Bok R, Chen AP, Cunningham CH, Zierhut ML, Zhang VY, Kohler SJ, Tropp J, Hurd RE, Yen YF, Nelson SJ, Vigneron DB, Kurhanewicz J.
Journal: Cancer Res (2008): 8607

Sensitivity and specificity of faecal tumour M2 pyruvate kinase for detection of colorectal adenomas in a large screening study
Authors: Haug U, Hundt S, Brenner H.
Journal: Br J Cancer (2008): 133

Detection of pyruvate dehydrogenase E1 alpha-subunit deficiencies in females by immunohistochemical demonstration of mosaicism in cultured fibroblasts
Authors: Lib MY, Brown RM, Brown GK, Marusich MF, Capaldi RA.
Journal: J Histochem Cytochem (2002): 877

Tumor M2-pyruvate kinase in lung cancer patients: immunohistochemical detection and disease monitoring
Authors: Schneider J, Neu K, Grimm H, Velcovsky HG, Weisse G, Eigenbrodt E.
Journal: Anticancer Res (2002): 311

Measurement of pyruvate in blood by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection
Authors: Wulkan RW, Verwers R, Neele M, Mantel MJ.
Journal: Ann Clin Biochem (2001): 554

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Amplite 比色法丙酮酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙酮酸的试剂盒，丙酮酸是细胞内代谢途径中的重要化合物。它来源于称为糖酵解的葡萄糖代谢。一分子葡萄糖分解成两个丙酮酸分子，通过两种方式之一提供活细胞能量。当氧气存在时（有氧呼吸），丙酮酸被丙酮酸脱氢酶转化为乙酰-CoA，丙酮酸脱氢酶进入柠檬酸循环（也称为三羧酸循环）产生ATP。当氧气不足时，丙酮酸盐会厌氧分解，在动物体内产生乳酸盐，在植物和微生物体内产生乙醇。丙酮酸盐的异常水平或乳酸盐与丙酮酸盐的浓度比可能与肝脏疾病或代谢紊乱有关，并且是患者临床和其他实验室研究中的一种诊断测量。 AAT Bioquest的Amplite 荧光丙酮酸盐检测试剂盒提供了一种灵敏的荧光检测方法，用于量化生物样品中的丙酮酸盐。它利用释放过氧化氢的酶偶联反应，可以在Ex / Em = 540 / 590nm处通过荧光酶标仪中的丙酮酸盐传感器检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法丙酮酸检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备样品以及连续稀释的丙酮酸标准溶液（50 µL）
2.加入等体积的工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm处的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor 丙酮酸传感器（组分A）中，制成200X Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液。

2.标准溶液

丙酮酸标准
将2μL100 mM丙酮酸盐（组分D）添加到998μLPBS（pH 7.0）中，得到200μM丙酮酸盐标准溶液（PS7）。 然后执行1：2的系列稀释，以得到剩余的系列稀释的丙酮酸标准品（PS6-PS1）。

3.工作溶液

将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到一个Enzyme Mix1瓶（组分B1）中，并充分混合。 将100μLddH2O加入一个Enzyme Mix2小瓶（组分B2）中并充分混合。 将整个小瓶的Enzyme Mix2（100μL）和25 uL的200X丙酮酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix1瓶中并充分混合。 注意：立即使用，避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.白色透明96孔微孔板中丙酮酸标准溶液和测试样品的布局。 PS =丙酮酸标准溶液（PS1- PS7，3.125至200 µM），BL =空白对照（PBS），TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局，准备丙酮酸标准品（PS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。

2.在丙酮酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL工作溶液，使丙酮酸测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下进行丙酮酸测定。

3.将反应混合物在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm处监测吸光度的增加。

参考文献

A replaceable dual-enzyme capillary microreactor using magnetic beads and its application for simultaneous detection of acetaldehyde and pyruvate
Authors: Shi J, Zhao W, Chen Y, Guo L, Yang L.
Journal: Electrophoresis (2012): 2145

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Journal: Cancer Res (2008): 8607

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Authors: Haug U, Hundt S, Brenner H.
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Authors: Schneider J, Neu K, Grimm H, Velcovsky HG, Weisse G, Eigenbrodt E.
Journal: Anticancer Res (2002): 311

Measurement of pyruvate in blood by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection
Authors: Wulkan RW, Verwers R, Neele M, Mantel MJ.
Journal: Ann Clin Biochem (2001): 554

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Amplite 荧光法L-丙氨酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙氨酸的试剂盒，L-丙氨酸（L-Ala）作为重要蛋白质的构建块起着至关重要的作用。 L-丙氨酸主要由来自乳酸的肌肉细胞合成并通过肝脏吸收到血液中。 它被谷氨酸丙酮酸转氨酶转化为丙酮酸，进入代谢主流。 L-Ala对葡萄糖的产生和血糖管理至关重要，并在免疫系统和预防肾结石方面发挥重要作用。 L-丙氨酸的缺乏通常是营养不良，低蛋白饮食和压力的标志。 AAT Bioquest的Amplite 荧光L-丙氨酸测定试剂盒提供了一种灵敏的荧光测定方法，用于量化生物样品中的L-丙氨酸。 它利用一种酶偶合反应释放过氧化氢，Quest Fluor L-丙氨酸传感器在Ex / Em = 540/590 nm处使用荧光酶标仪进行检测。检测限：~3uM，任何带有-SH基团的物质，如DTT、半胱氨酸，都会干扰测定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法L-丙氨酸检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品以及连续稀释的L-丙氨酸标准品（50 µL）
2.加入等体积的L-丙氨酸工作溶液（50 µL）
3.在37°C下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Quest Fluor L-丙氨酸传感器储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor L-丙氨酸传感器（组分A）中，制成200X Quest Fluor L-丙氨酸传感器储备溶液。

1.2 L-丙氨酸标准溶液（1 mM）：
将10 µL 100 mM L-丙氨酸（组分D）加到990 µL PBS（pH 7.0）中，得到1 mM L-丙氨酸溶液。

2.标准溶液

L-丙氨酸标准
向900 µL PBS中加入100 µL 1 mM L-丙氨酸标准溶液，制成100 µM L-丙氨酸溶液（AS7）。进行1：2连续稀释以获得连续稀释的L-丙氨酸标准品（AS6-AS1）。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合1瓶（组分B1）中，并充分混合。

3.2 将100μLddH2O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中并充分混合。

3.3 将整个小瓶（100μL）的Enzyme Mix 2和25 uL的200X L-丙氨酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中； 混合均匀。 注意：工作解决方案不稳定。 立即使用，避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中L-丙氨酸标准品和测试样品的布局。 AS = L-丙氨酸标准品（AS1-AS7，1.5至100 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备L-丙氨酸标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL L-丙氨酸工作溶液添加到L-Alanine标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使L-Alanine测定的总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL L-丙氨酸工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下运行L-丙氨酸测定。

3.将反应混合物在37°C孵育30分钟至1小时。

4.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止：570 nm）下监测荧光的增加。

参考文献

Reactivity of beta-methylamino-L-alanine in complex sample matrixes complicating detection and quantification by mass spectrometry
Authors: Glover WB, Liberto CM, McNeil WS, Banack SA, Shipley PR, Murch SJ.
Journal: Anal Chem (2012): 7946

Synthesis and characterization of silver/alanine nanocomposites for radiation detection in medical applications: the influence of particle size on the detection properties
Authors: Guidelli EJ, Ramos AP, Zaniquelli ME, Nicolucci P, Baffa O.
Journal: Nanoscale (2012): 2884

Detection of farnesyltransferase interface hot spots through computational alanine scanning mutagenesis
Authors: Perez MA, Sousa SF, Oliveira EF, Fernandes PA, Ramos MJ.
Journal: J Phys Chem B (2011): 15339

Molecular beacon based bioassay for highly sensitive and selective detection of nicotinamide adenine dinucleotide and the activity of alanine aminotransferase
Authors: Tang Z, Liu P, Ma C, Yang X, Wang K, Tan W, Lv X.
Journal: Anal Chem (2011): 2505

Highly specific substrates of proteinase 3 containing 3-(2-benzoxazol-5-yl)-l-alanine and their application for detection of this enzyme in human serum
Authors: Wysocka M, Lesner A, Guzow K, Kulczycka J, Legowska A, Wiczk W, Rolka K.
Journal: Anal Chem (2010): 3883

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Journal: J Agric Food Chem (2010): 120

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适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备L-丙氨酸工作溶液（50 µL）
2.添加L-丙氨酸标准品或测试样品（50 µL）
3.在37°C下孵育30分钟至1小时
4.检测575 nm处的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Quest Fluor L-丙氨酸探针储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor L-丙氨酸探针（组分A）中，制成200X Quest Fluor L-丙氨酸探针储备溶液。

1.2 L-丙氨酸标准溶液（1 mM）：
将10 µL 100 mM L-丙氨酸标准溶液（组分D）加到990 µL PBS（pH 7.0）中，得到1 mM L-丙氨酸标准溶液。

2.标准溶液

L-丙氨酸标准
向900 µL PBS中加入100 µL 1 mM L-丙氨酸标准溶液，制成100 µM L-丙氨酸标准溶液（AS7）。取100 µM L-丙氨酸标准溶液（AS7），并在PBS中进行1：2连续稀释，以得到连续稀释的L-丙氨酸标准溶液（AS6-AS1）。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到一个Enzyme Mix1瓶（组分B1）中，并充分混合。

3.2 将100μLddH2O加入一个Enzyme Mix2小瓶（组分B2）中并充分混合。

3.3 将整个小瓶（100μL）的Enzyme Mix2和25 uL的200X L-丙氨酸探针储备溶液转移到Enzyme Mix1瓶中，并充分混合以制成L-丙氨酸工作溶液。 注意：L-丙氨酸工作溶液不稳定-请立即使用，并避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.白色透明96孔微孔板中L-丙氨酸标准品和测试样品的布局。 AS = L-丙氨酸标准品（AS1-AS7，1.563至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备L-丙氨酸标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL L-丙氨酸工作溶液添加到L-Alanine标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使L-Alanine测定的总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL L-丙氨酸工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下运行L-丙氨酸测定。

3.将反应液在37°C孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm处监测吸光度的增加。

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