月度归档：2024年04月

AF546 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
AF546 酪胺价格 2823
产品规格

200 slides

产品货号

产品参数
Ex (nm) 561 Em (nm) 572
分子量 1282.88 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

AF532酪胺是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明，酪胺信号放大（TSA）是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术，具有更高的检测灵敏度。TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力，该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现大IHC检测，酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号，并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。AF532酪胺含有明亮的AlexaFluor®532，可以使用标准FITC滤波片组轻松检测（AlexaFluor®是Fisher的商标）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的AF532酪胺。 注：200slides：一管试剂足够200个玻片使用；注2：200slides大约为100ug。

点击查看光谱

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Cy3/TRITC滤波片组
Em： Cy3/TRITC滤波片组
滤波片: Cy3/TRITC滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 修复/透化/阻断细胞或组织
  2. 在封闭缓冲液中添加一抗
  3. 添加结合HRP的二抗
  4. 准备酪酰胺工作溶液，并在室温下在细胞或组织中涂抹5-10分钟

 

溶液配制

储备溶液配制

酪胺储备溶液（200X）：向小瓶中加入100 µL DMSO，并充分混合。 注意：未使用的酪胺储备溶液可在2-8℃下储存。

 

工作溶液配制

酪胺工作溶液（1倍）：将100 µL的酪胺储备溶液添加到包含0.003％H2O2的20 mL缓冲液中。注意：可以使用pH = 7.4的Tris Buffer以获得佳性能。注意：应立即使用酪胺工作溶液。 注意：20 mL溶液适合200次测试。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 核蓝 DCS1 350/461
17550 核绿 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核红 DCS1 642/660

  

参考文献

Enhanced detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus in fixed tissues by in situ hybridization following tyramide signal amplification
Authors: Trang NT, Hirai T, Ngan PH, Lan NT, Fuke N, Toyama K, Yamamoto T, Yamaguchi R.
Journal: J Vet Diagn Invest (2015): 326

Tyramide Signal Amplification for Immunofluorescent Enhancement
Authors: Faget L, Hnasko TS.
Journal: Methods Mol Biol (2015): 161

KSHV cell attachment sites revealed by ultra sensitive tyramide signal amplification (TSA) localize to membrane microdomains that are up-regulated on mitotic cells
Authors: Garrigues HJ, Rubinchikova YE, Rose TM.
Journal: Virology (2014): 75

Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis
Authors: Stack EC, Wang C, Roman KA, Hoyt CC.
Journal: Methods (2014): 46

Rapid and sensitive detection of Escherichia coli O157:H7 in milk and ground beef using magnetic bead-based immunoassay coupled with tyramide signal amplification
Authors: Aydin M, Herzig GP, Jeong KC, Dunigan S, Shah P, Ahn S.
Journal: J Food Prot (2014): 100

Sensitive whole-mount fluorescent in situ hybridization in zebrafish using enhanced tyramide signal amplification
Authors: Lauter G, Soll I, Hauptmann G.
Journal: Methods Mol Biol (2014): 175

Characterization of GABAergic neurons in the mouse lateral septum: a double fluorescence in situ hybridization and immunohistochemical study using tyramide signal amplification
Authors: Zhao C, Eisinger B, Gammie SC.
Journal: PLoS One (2013): e73750

Quantification of alpha-tubulin isotypes by sandwich ELISA with signal amplification through biotinyl-tyramide or immuno-PCR
Authors: Draberova E, Stegurova L, Sulimenko V, Hajkova Z, Draber P.
Journal: J Immunol Methods (2013): 63

Development of a near-infrared fluorescence ELISA method using tyramide signal amplification
Authors: Gong H, Cradduck M, Cheung L, Olive DM.
Journal: Anal Biochem (2012): 27

Integrated tyramide and polymerization-assisted signal amplification for a highly-sensitive immunoassay
Authors: Yuan L, Xu L, Liu S.
Journal: Anal Chem (2012): 10737

AF594 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
AF594 酪胺价格 2823
产品规格

200 slides

产品货号

产品参数
Ex (nm) 590 Em (nm) 618
分子量 841.95 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

AF594 酪胺是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明，酪胺信号放大（TSA）是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术，具有更高的检测灵敏度。TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力，该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现大IHC检测，酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号，并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。AF594酪胺含有明亮的AlexaFluor®594，可以使用标准FITC滤波片组轻松检测（AlexaFluor®是Fisher的商标）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的AF594 酪胺。注：200slides：一管试剂足够200个玻片使用；注2：200slides大约为100ug。

点击查看光谱

 

适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Cy3/TRITC滤波片组
Em： Cy3/TRITC滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
滤波片: Cy3/TRITC滤波片组
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 修复/透化细胞或组织
  2. 在封闭缓冲液中添加一抗
  3. 加入结合HRP的二抗
  4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

酪胺储备溶液（200X）：向小瓶中加入100 µL DMSO，并充分混合。 注意：未使用的酪胺储备溶液可在2-8℃下储存。

 

工作溶液配制

酪胺工作溶液（1X）：将100µL的酪胺储备溶液添加到包含0.003％H2O2的20 mL缓冲液中。注意：可以使用pH = 7.4的Tris Buffer以获得佳性能。 注意：应立即使用酪胺工作溶液。 注意：20 mL溶液适合200次测试。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 核蓝 DCS1 350/461
17550 核绿 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核红 DCS1 642/660

  

参考文献

Enhanced detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus in fixed tissues by in situ hybridization following tyramide signal amplification
Authors: Trang NT, Hirai T, Ngan PH, Lan NT, Fuke N, Toyama K, Yamamoto T, Yamaguchi R.
Journal: J Vet Diagn Invest (2015): 326

Tyramide Signal Amplification for Immunofluorescent Enhancement
Authors: Faget L, Hnasko TS.
Journal: Methods Mol Biol (2015): 161

KSHV cell attachment sites revealed by ultra sensitive tyramide signal amplification (TSA) localize to membrane microdomains that are up-regulated on mitotic cells
Authors: Garrigues HJ, Rubinchikova YE, Rose TM.
Journal: Virology (2014): 75

Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis
Authors: Stack EC, Wang C, Roman KA, Hoyt CC.
Journal: Methods (2014): 46

Rapid and sensitive detection of Escherichia coli O157:H7 in milk and ground beef using magnetic bead-based immunoassay coupled with tyramide signal amplification
Authors: Aydin M, Herzig GP, Jeong KC, Dunigan S, Shah P, Ahn S.
Journal: J Food Prot (2014): 100

Sensitive whole-mount fluorescent in situ hybridization in zebrafish using enhanced tyramide signal amplification
Authors: Lauter G, Soll I, Hauptmann G.
Journal: Methods Mol Biol (2014): 175

Characterization of GABAergic neurons in the mouse lateral septum: a double fluorescence in situ hybridization and immunohistochemical study using tyramide signal amplification
Authors: Zhao C, Eisinger B, Gammie SC.
Journal: PLoS One (2013): e73750

Quantification of alpha-tubulin isotypes by sandwich ELISA with signal amplification through biotinyl-tyramide or immuno-PCR
Authors: Draberova E, Stegurova L, Sulimenko V, Hajkova Z, Draber P.
Journal: J Immunol Methods (2013): 63

Development of a near-infrared fluorescence ELISA method using tyramide signal amplification
Authors: Gong H, Cradduck M, Cheung L, Olive DM.
Journal: Anal Biochem (2012): 27

Integrated tyramide and polymerization-assisted signal amplification for a highly-sensitive immunoassay
Authors: Yuan L, Xu L, Liu S.
Journal: Anal Chem (2012): 10737

NPG047100-pall清洁度检测膜片NPG047100颇尔NPG047100*

发表于由

【简单介绍】

pall清洁度检测膜片NPG047100颇尔NPG047100*,PALL ULTIPORN66，Part No:NPG047100,Removal Rating:3um;PALL尼龙膜汽车零配件清洁度检测滤膜3um孔径NPG047100
NPG047100:47mm直径，3um孔径，100PK.

【详细说明】

pall清洁度检测膜片NPG047100颇尔NPG047100*

PALL ULTIPORN66，Part No:NPG047100,Removal Rating:3um

PALL尼龙膜汽车零配件清洁度检测滤膜3um孔径NPG047100
NPG047100:47mm直径，3um孔径，100PK.

 

Amplite 比色法葡萄糖氧化酶检测试剂盒 红色荧光-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 比色法葡萄糖氧化酶检测试剂盒 红色荧光 价格 4245
产品规格

500 Tests

产品货号

Amplite 比色法葡萄糖氧化酶检测试剂盒 红色荧光

产品参数
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 – 溶剂 –
存储条件 –
产品概述

Amplite 比色法葡萄糖氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于定量蛋白的试剂盒，葡萄糖氧化酶是二聚体蛋白质，其催化β-D-葡萄糖氧化成过氧化氢和D-葡糖酸-1,5-内酯，其被水解成葡糖酸。 它广泛用于测定体液中的葡萄糖以及从饮料，食品和其他农产品中去除残留的葡萄糖和氧气。 此外，葡萄糖氧化酶通常用于生物传感器中以检测葡萄糖。 Amplite 葡萄糖氧化酶检测试剂盒为溶液中葡萄糖氧化酶的测量提供了一种快速而灵敏的方法。 它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且很容易适应自动化而无需分离步骤。 该试剂盒使用我们的Amplite Red底物，可使用570 nm的吸光度酶标仪进行监测。 使用Amplite 比色葡萄糖氧化酶检测试剂盒，我们检测到低至12.5 mU / mL的葡萄糖氧化酶。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法葡萄糖氧化酶检测试剂盒。 

点击查看光谱

 

适用仪器

光吸收酶标仪  
吸收: 570nm
推荐孔板: 透明孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备工作溶液（50μL）
2.添加葡萄糖氧化酶标准品或测试样品（50μL）
3.在37°C孵育10-30分钟
4.监测OD = 570nm处的吸光度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（250X）：
将100μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red（组分A）的小瓶中。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。推荐提供的测定缓冲液（pH 7.4）。

1.2 HRP库存解决方案（50X）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

1.3 葡萄糖氧化酶原液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入葡萄糖氧化酶（组分D）的小瓶中。

1.4 葡萄糖原液（10X）：
将5mL测定缓冲液（组分B）加入葡萄糖小瓶（组分F）中。

 

2.标准溶液

葡萄糖氧化酶标准
通过将2μL的100U / mL葡萄糖氧化酶储备溶液稀释到200μL测定缓冲液（组分B）中来制备葡萄糖氧化酶标准品，以具有1000mU / mL葡萄糖氧化酶标准溶液。 然后进行1：100连续稀释，然后进行1：2连续稀释，得到连续稀释的葡萄糖氧化酶标准品，从10 mU / mL至0.156 mU / mL（GOS1 – GOS7）。

 

3.工作溶液

将20μLDelterite Red储备液（250X），100μLHRP储备液（50X）和500μL葡萄糖储备液（10X）加入4.3 mL分析缓冲液（组分B）中，制成5 mL工作溶液。

 

样品分析

表1.透明底96孔微孔板中葡萄糖氧化酶标准品和测试样品的布局。 GOS =葡萄糖氧化酶标准品（GOS1-GOS7,0.156至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL BL TS TS
GOS1 GOS1 … …
GOS2 GOS2 … …
GOS3 GOS3    
GOS4 GOS4    
GOS5 GOS5    
GOS6 GOS6    
GOS7 GOS7    

表2.每个孔的试剂组成

孔 容积 试剂
GOS1-GOS7 50ul 连续稀释（0.156至10 mU / mL）
BL 50ul 分析缓冲液（组分B）
TS 50ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备葡萄糖氧化酶标准品（GOS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向葡萄糖氧化酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应在37°C孵育10至30分钟，避光。

4.用OD = 570nm的吸光度板读数器监测吸光度的增加。

 

参考文献

A reassessment of the carnivorous status of salmonids: Hepatic glucokinase is expressed in wild fish in Kerguelen Islands
Authors: Lucie Marandel, Philippe Gaudin, Frančois Guéraud, Stéphane Glise, Alexandre Herman, Elisabeth Plagnes-Juan, Vincent Véron, Stéphane Panserat, Jacques Labonne
Journal: Science of The Total Environment (2018): 276–285

Overcoming 5-Fu resistance in human non-small cell lung cancer cells by the combination of 5-Fu and cisplatin through the inhibition of glucose metabolism
Authors: Jun-gang Zhao, Kai-ming Ren, Jun Tang
Journal: Tumor Biology (2014): 12305–12315

 

相关产品

产品名称 货号
Amplite 比色法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒 Cat#11307
Amplite 荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒 Cat#11300
Amplite NADPH检测试剂盒(比色法) Cat#15272

PYCARD Polyclonal Antibody

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  • 详细信息
  • 询价记录
  • 相关实验
  • 技术资料
    • 抗体名：

      PYCARD Polyclonal Antibody

    • 靶点：

      PYCARD

    • 浓度：

      0.5 mg/ml

    • 应用范围：

      Immunohistochemistry (Paraffin), Western Blot

    • 宿主：

      Goat

    • 适应物种：

      Human

    • 克隆性：

      单克隆

    • 保存条件：

      -20° C, Avoid Freeze/Thaw Cycles

    • 形态：

      Liquid

    • 亚型：

      IgG

    • 免疫原：

      Synthetic peptide corresponding to the C terminus amino acids RESQSYLVEDLERS.

    • 规格：

      100 ug

    风险提示：仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。

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nunc

Amplite 荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒 红色荧光-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒 红色荧光 价格 2823
产品规格

500 Tests

产品货号

Amplite 荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒 红色荧光

产品参数
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 – 溶剂 –
存储条件 –
产品概述

Amplite 荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的葡萄糖检测的试剂盒，葡萄糖氧化酶是二聚体蛋白质，其催化β-D-葡萄糖氧化成过氧化氢和D-葡糖酸-1,5-内酯，其被水解成葡萄糖酸。它广泛用于测定体液中的葡萄糖以及从饮料，食品和其他农产品中去除残留的葡萄糖和氧气。此外，葡萄糖氧化酶通常用于生物传感器中以检测葡萄糖。 Amplite 葡萄糖氧化酶检测试剂盒为溶液中葡萄糖氧化酶的测量提供了一种快速而灵敏的方法。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。该套件使用我们的Amplite Red基板，可实现双重可录制模式。荧光信号可以通过荧光酶标仪或吸光度酶标仪轻松读取。使用Amplite 荧光葡萄糖氧化酶检测试剂盒，我们在100μL反应体积中检测到低至0.05 mU / mL的葡萄糖氧化酶。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒。 

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适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 540nm
Em: 590nm
Cutoff: 570nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备GO工作溶液（50μL）
2.添加葡萄糖氧化酶标准品或测试样品（50μL）
3.在37°C孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色储备液（250X）：
将100μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。推荐提供的测定缓冲液（pH 7.4）。

2. HRP库存解决方案（50X）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.葡萄糖氧化酶标准溶液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液加入葡萄糖氧化酶小瓶（组分D）中。

4.葡萄糖原液（10X）：
将5mL测定缓冲液加入葡萄糖小瓶（组分F）中。

 

2.标准溶液

葡萄糖氧化酶标准
通过将2μL的100U / mL葡萄糖氧化酶标准溶液稀释到200μL的测定缓冲液（组分B）中来制备葡萄糖氧化酶标准品，以具有1000mU / mL葡萄糖氧化酶标准溶液。 然后取10μL1000mU/ mL葡萄糖氧化酶标准溶液，进行1：100稀释，得到10mU / mL葡萄糖氧化酶标准溶液（GOS7）。然后进行1：3连续稀释以获得剩余的连续稀释的葡萄糖氧化酶标准品（GOS6-GOS1）。包括非葡萄糖氧化酶缓冲液作为空白对照。 终的葡萄糖氧化酶浓度应低两倍（即0至5mU / mL）。注意：高浓度的葡萄糖氧化酶可能会因Amplite Red（非荧光产物）的过氧化而导致荧光信号降低。

 

3.工作溶液

将20μLDelterite Red储备液（250X），100μLHRP储备液（50X）和500μL葡萄糖储备液（10X）加入4.3 mL分析缓冲液（组分B）中，使总体积为5 mL葡萄糖氧化酶（GO）工作溶液。 避光。

 

样品分析

表1.固体黑色96孔微孔板中葡萄糖氧化酶标准品和测试样品的布局。 GOS =葡萄糖氧化酶标准品（GOS1-GOS7,0.01至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL BL TS TS
GOS1 GOS1 … …
GOS2 GOS2 … …
GOS3 GOS3    
GOS4 GOS4    
GOS5 GOS5    
GOS6 GOS6    
GOS7 GOS7    

表2.每个孔的试剂组成

孔 容积 试剂
GOS1-GOS7 50ul 连续稀释（0.01至10 miU / mL）
BL 50ul 分析缓冲液（组分B）
TS 50ul 样品

1.根据表1和表2中提供的布局制备葡萄糖氧化酶标准品（GOS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.在葡萄糖氧化酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLGO工作溶液，使总葡萄糖氧化酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应在37°C孵育10至30分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm）监测荧光强度。 注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 然而，与荧光读数相比，吸收检测具有更低的灵敏度。

 

参考文献

A reassessment of the carnivorous status of salmonids: Hepatic glucokinase is expressed in wild fish in Kerguelen Islands
Authors: Lucie Marandel, Philippe Gaudin, Frančois Guéraud, Stéphane Glise, Alexandre Herman, Elisabeth Plagnes-Juan, Vincent Véron, Stéphane Panserat, Jacques Labonne
Journal: Science of The Total Environment (2018): 276–285

Overcoming 5-Fu resistance in human non-small cell lung cancer cells by the combination of 5-Fu and cisplatin through the inhibition of glucose metabolism
Authors: Jun-gang Zhao, Kai-ming Ren, Jun Tang
Journal: Tumor Biology (2014): 12305–12315

 

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磺胺甲嘧啶; Sulfamerazine; 别名:4-氨基-N-(4-甲基-2-嘧啶基)苯磺酰胺 N1-(4-甲基嘧啶-2-基)磺胺;品牌: Vetec (Sigma-Aldrich旗下品牌)

发表于由

详细描述

品牌： Vetec 产地： 中国
产品英文名称： Sulfamerazine CAS编号： <产品号JPS-2825/">127-79-7
别名： 4-氨基-N-(4-甲基-2-嘧啶基)苯磺酰胺 N1-(4-甲基嘧啶-2-基)磺胺 分子式： C11H12N4O2S
含量： % 产品规格：

产品信息
中文名:磺胺甲嘧啶
英文名:Sulfamerazine
别名:4-氨基-N-(4-甲基-2-嘧啶基)苯磺酰胺 N1-(4-甲基嘧啶-2-基)磺胺
货号：V900598
品牌：Vetec
MDL号：MFCD00023212
CAS 号：127-79-7
线性分子式：C11H12N4O2S
分子量：264.30
产品包装：瓶装
产品起订量：1
产品库存：国内现货

 

品牌信息
Vetec 品牌是 Sigma-Aldrich 旗下新成员，以极具亲和力的本地价格为用户提供质量可靠的常用生化和化学产品。 Vetec 以满足日常实验要求为标准制定产品的检测指标，依托 Sigma-Aldrich 全球统 一的质量体系对每批产品进行严格的测试，以确保产品的批次稳定性。优异的可靠性可以让您每天放心地使用 Vetec 产品，不再担心因为质量问题给实验带不必要的干扰。

上海金畔生物科技有限公司

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Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光 价格 2823
产品规格

200 Tests

产品货号

Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光

产品参数
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 – 溶剂 –
存储条件 –
产品概述

Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的葡萄糖检测的试剂盒，髓过氧化物酶(MPO)是一类具有过氧化物酶活性的绿色血红素蛋白，大量存在于中性粒细胞和单核细胞中。它可以催化来自细胞毒素酸或者其他中间产物的双氧水或者卤化物反应，在氧依赖性杀死肿瘤细胞和微生物过程扮演着重要的角色。MPO的缺乏症是一种遗传性的酶缺乏，诱发免疫缺陷。因此治疗MPO的抑制剂具有很大的发展前景。Amplite髓过氧化物酶检测试剂盒能提供一种快速灵敏的检测方法来测定溶解状态或者细胞裂解液中的MPO。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。这个试剂盒使用我们的Amplite Red底物使其成为双记录模式。红色的荧光信号很容易的通过荧光酶标仪（540／590nm）检测到或者被吸收酶标仪（576nm）检测到。通过Amplite 荧光髓过氧化物酶检测试剂盒在100 ul检测体积中能检测到5ng／ml的髓过氧化物酶。本试剂盒可以自动的高通量筛选MPO的抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒。 

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适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 540nm
Em: 590nm
Cutoff: 570nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.MPO标准品或测试样品（50μL）
2.添加MPO工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度（截止570 nm）

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH7.4。

1.2 H2O2储备溶液（500X，10 mM）：
将10μL的3％H2O2（0.88M，组分C）加入870μL的测定缓冲液（组分B）中。注意：稀释的H2O2溶液不稳定。应丢弃未使用的部分。

1.3 髓过氧化物酶（MPO）标准溶液（200 mU / mL）：
将50μL测定缓冲液（组分B）加入到髓过氧化物酶标准品（组分D）的小瓶中。注意：一个小瓶含有约5 – 10 mU的髓过氧化物酶。

2. HRP库存解决方案（50X）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.葡萄糖氧化酶标准溶液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液加入葡萄糖氧化酶小瓶（组分D）中。

4.葡萄糖原液（10X）：
将5mL测定缓冲液加入葡萄糖小瓶（组分F）中。

 

2.标准溶液

MPO标准
将20μL200mU / mL MPO标准溶液加入380μL测定缓冲液（组分B）中，得到10 mU / mL MPO标准溶液（MPO7）。 取10 mU / mL MPO标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的系列稀释MPO标准品（MPO6 – MPO1）。

 

3.工作溶液

将20μLDelterite 红色储备液（250X）和10μLH2O2（500X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.03mL MPO工作溶液。 避光。

 

样品分析

表1. 96孔固体黑色微孔板中MPO标准品和测试样品的布局。 MPO =髓过氧化物酶标准品（MPO1-MPO7,0.01至10mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
MPO1 MPO1 … …
MPO2 MPO2 … …
MPO3 MPO3    
MPO4 MPO4    
MPO5 MPO5    
MPO6 MPO6    
MPO7 MPO7    

表2.每个孔的试剂组成。 注意，由于Amplite Red底物（非荧光产物）的过度氧化，高浓度的MPO可能导致荧光信号降低。

孔 容积 试剂
MPO1-MPO7 50ul 连续稀释（0.01至10 mU / mL）
BL 50ul 分析缓冲液（组分B）
TS 50ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备髓过氧化物酶标准品（MPO），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向髓过氧化物酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLMPO工作溶液，使总MPO测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLMPO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）监测荧光强度。 注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有更低的灵敏度。

 

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