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免疫球蛋白 Fc 位点的常见修饰——可沉默免疫效应功能

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免疫球蛋白 Fc 位点的常见修饰——可沉默免疫效应功能

消除免疫球蛋白 Fc 与 Fc γ 受体 (FcγR) 的结合对于避免对治疗性抗体和融合蛋白产生不需要的炎症反应是非常必要的。下面我们描述了免疫球蛋白的一些常见修饰及其对免疫反应的影响。

IgG1 与 IgG4

IgG1 mAb 通过可变 (Fab) 区与靶抗原结合，并可以通过恒定 (Fc) 区参与其他效应功能。许多免疫细胞表达特异性结合 IgG Fc 区 (FcγR) 的受体。 FcγR 识别 IgG 包被的靶标，例如调理病原体或免疫复合物；交联导致下游信号级联的内化和激活。 FcγR 激活引发的两种效应细胞活性包括抗体依赖性细胞吞噬作用 (ADCP) 和抗体依赖性细胞毒性 (ADCC)。 IgG1 Fc 区还包含补体成分 C1q 的结合位点，可启动补体级联反应，导致补体依赖性细胞毒性 (CDC)。 IgG Fc 还可以与新生儿 Fc 受体 FcRn 结合，调节抗体回收 – 影响 IgG 的半衰期。

多年来，科学家们研究了与这些不同配体结合所涉及的特定残基，目的是改变抗体的天然特性，以增强被认为是积极的作用（例如，提高对肿瘤细胞的杀伤力，或延长半衰期）。生命）或减少被视为负面的影响（例如，避免过度刺激免疫反应）。

许多治疗性 IgG4 抗体已被开发出来，因为人们曾经认为这种同种型缺乏效应子功能。然而，事实并非如此，IgG4 CD28 抗体 TGN1412 的灾难性试验表明，该试验在 6 名健康人类志愿者中引发了细胞因子风暴，其中一人失去了脚趾和手指，所有人都面临着未来潜在的健康并发症。

什么是抗体中的 LALA 突变？

广泛使用的 IgG1 变体之一是 L234A/L235A (LALA)。这些取代减少了与 IgG Fc 受体 FcγRI、FcγRII 和 FcγRIII 以及补体成分 C1q 的结合。当不需要Fc受体的结合和激活时，例如当产品被用作细胞因子或类似物的拮抗剂时，此类抗体是有用的。许多使用LALA突变的治疗抗体已进入临床试验（例如bimagrumab、cemiplimab、galcanezumab、progolimab、risankizumab、spesolimab、teplizumab）。然而，现在已知 LALA 变体仍然与 Fc 受体有大量结合，因此已经开发了许多其他变体以寻求消除与 Fcγ 受体的结合

什么是抗体中的 LALAPG / LALA-PG 突变？

LALAPG 包括三个点突变：L234A、L235A 和 P329G。 LALAPG 变体抑制与 FcγR 和 C1q 的结合，而 FcRn 结合和 Fc 稳定性不受影响。具有这组突变的几种抗体已进入临床试验（例如cergutuzumab、cibisatamab、faricimab、RG7386）。

什么是抗体中的 N297A 突变？

N297A 是小鼠和人免疫球蛋白中第 297 位丙氨酸 (A) 被天冬酰胺 (N) 取代的突变。

Fc 区被糖基化，N297 突变很容易消除碳水化合物，导致与 Fc 受体和 C1q 的结合减少。至少三种使用 N297A 突变的治疗抗体进入临床试验（例如 atezolizumab、clazakizumab、otelixizumab）。然而，碳水化合物的去除是一个巨大的变化，会显着破坏 Fc 结构的稳定性，导致可制造性、稳定性和药代动力学方面的潜在问题。

ichorbio 拥有一系列Fc Silenced


Mouse Anti-Mouse PD-1 Antibody (RMP1-14) LALAPG

Mouse Anti-Mouse PD-1 Antibody (RMP1-14) D265A

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DNA断裂定量分析（AP位点）——DNA/RNA损伤分析

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DNA的氧化损伤是由于DNA与活性氧（ROS）尤其是羟自由基之间的相互作用造成的。由超氧阴离子和过氧化氢通过Fenton反应产生的羟自由基在DNA中产生多重修饰。羟自由基对脱氧核糖基团的氧化攻击将导致DNA释放自由碱基，产生链断裂、各种糖修饰以及单个无碱基位点（AP位点）。事实上，AP位点（AP Sites）是由ROS产生的损伤的主要类型。据估计，每个哺乳动物细胞，每天能产生50,000到200,000个AP位点，这些不能及时修复的AP位点会进一步抑制拓扑异构酶活性、DNA的复制以及转录等功能，并导致基因的癌变。

针对DNA/RNA损伤的检测，上海金畔生物科技有限公司向您推荐Cell BioLabs完整的DNA/RNA氧化损伤检测方案，其OxiSelect™ Oxidative DNA / RNA Damage ELISA Kits（8-OHdG or 8-OHG Quantitation）提供了快速高效检测核酸中8-OHG或8-OHdG含量的实验方案；OxiSelect™ Comet Assays (Single Cell Gel Electrophoresis)则为您提DNA断裂定量分析（AP位点）——DNA/RNA损伤分析供多种选择的彗星分析产品；针对DNA损伤中的AP位点检测，Cell Biolabs的OxiSelect™ Oxidative DNA Damage Quantitation Kit (AP Sites)则使用经典的ARP检测方案；DNA双链断裂分析为您提供了快捷的DSB分析试剂。

这些细胞在氧化损伤中发生的DNA嘌呤或者嘧啶碱基直接脱去的反应，并形成核酸中无嘌呤（apurinic）和脱嘧啶（apyrimidinic）位点，统简称AP位点。OxiSelect™ Oxidative DNA Damage Quantitation Kit (AP Sites)（货号：STA-324）则专门为AP位点的高灵敏检测而定制，可用于细胞、组织等多种来源的基因组样品。

由于醛反应性探针（ARP；N’-氨氧甲基羰肼基-D-生物素）特异性地与AP位点的开环上的醛基反应。通过这个反应可以检测到导致醛基形成的DNA修饰。Cell Biolabs的OxiSelect™ Oxidative DNA Damage Quantitation Kit (AP Sites)用过量ARP试剂反应后，DNA上的所有AP位点均用生物素做了标签。可以用亲和素-生物素法，用连接到亲和素上的过氧化物酶或碱性磷酸酶做比色法检测来对这些带有生物素标签的AP位点进行计数。该DNA断裂定量试剂盒（AP位点）包含用于检测每1×10e5个碱基对中4到40个AP位点的所有必需溶液，试剂盒内包括标准对照，针对96孔板分析，能完成至少50次检测。

产品名称 货号 产品说明（点击查看说明书）
OxiSelect™ Oxidative DNA Damage Quantitation Kit (AP Sites) STA-324 通过酶联反应检测，50次分析

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