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肽储存和处理

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肽储存和处理

储存

冻干肽应储存在阴凉、避光、干燥的地方。为了获得最佳保存效果，请将肽储存在 -20°C 或更低的温度下，并远离强光。大多数在此温度下储存的肽将保持稳定数年。

吸收水分会大大降低肽的稳定性，并可能降低总肽含量。含有肽的小瓶在打开之前应先升温至室温。这将减少固体肽的冷表面或容器内部从空气中吸收水分。取出所需数量后，应尽快重新密封小瓶，最好在干燥氮气气氛下，然后将其放回冷藏室。

溶液中含有 Met、Cys 或 Trp 残基的肽的保质期因氧化而受到限制。为了避免重复冻融循环，建议将储备溶液分成等份。如果绝对无法避免在溶液中储存肽，请使用 pH 5-6 的无菌缓冲液，并在 -20°C 下储存等分试样，以延长溶液中肽的储存期限。溶解度肽的溶解度取决于序列。溶解肽可能很困难，特别是当肽非常疏水时。一般来说，尝试将肽溶解在无菌蒸馏水中。如果肽仍然不溶，请尝试以下步骤：

  • 超声处理可能会有所帮助，因为它可以提高溶解速度。

  • 碱性肽添加10%乙酸或0.1% TFA；对于酸性肽，使用 1% 氢氧化铵或 10% 碳酸氢铵进一步超声处理可提高溶解度。

  • 对于仍然不溶的肽，添加有机溶剂，例如乙腈、DMSO 或 DMF，浓度高达 20% (v/v)。请注意，这些溶剂可能会干扰某些生物测定。对于具有二级结构的肽，可能需要添加离液剂，例如尿素或盐酸胍。

冷冻保护剂的储存方案

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冷冻保护剂的储存方案

以下方案用于长期保存未染色的自由浮动脑切片。将脑切片转移至冷冻保护剂中并储存在-20°C。根据染色目的，选择合适的用于保存脑切片。

 

冷冻保护剂 1（用于光学显微镜）

 

制备 500 ml 冷冻保护剂

  • 蔗糖—————————————- 150克

  • 0.1M PB —————————- 200 毫升

  • 乙二醇——————– 150 毫升

  • 添加更多 0.1M PB 至最终体积 500 ml，并储存于-20 °C。

冷冻保护剂 2（用于电子显微镜和光学显微镜）

 

制备 1000 ml 冷冻保护剂

  • 乙二醇 ——————- 300 毫升

  • 甘油 ————————————– 300 毫升

  • 0.2M PB ————————– 100 毫升

  • 蒸馏水 ——————- 300 毫升

充分混合并储存在-20°C。

 

冷冻保护剂 3（用于免疫荧光）

 

制备 1000 ml 冷冻保护剂

  • 蔗糖—————————————– 300克

  • 聚乙烯吡咯烷酮 (PVP-40) — 10 克

  • 0.1M PB —————————————– 500 毫升

  • 乙二醇——————— 300毫升

将 PVP-40 添加到 0.1M PB。搅拌溶解。缓慢加入蔗糖溶解，然后加入乙二醇并用0.1M PB定容至1000ml。储存于-20°C。

肽的重构、​​溶解度和储存

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肽的重构、​​溶解度和储存

为了确保我们的材料保持其完整性，建议遵循以下存储和使用指南。一般来说，我们不必将肽溶解在水性缓冲液中以进行质量控制。我们的建议基于经验和肽序列。  

最规则和带电的肽  

要确定溶解肽的合适方法，请仅使用少量合适的溶剂。将肽溶解在蒸馏水或去离子无菌水中（如果可能，无氧）。只有当肽溶解后，才应添加所需的缓冲盐/溶液，并将溶液稀释至最终浓度，即先溶解肽，然后添加缓冲液。 
肽溶液中可能发生细菌降解。 

始终使用无菌水溶解肽。 

如果需要，可以通过 0.45 um 或 0.2 um 过滤器过滤肽溶液。不要将肽溶液保存在室温下。 
半胱氨酸、蛋氨酸或色氨酸等氨基酸容易氧化，应溶解并储存在无氧水中。这可以通过在减压下通过保留惰性气体如氮气、氦气或氩气进行脱气来制备。 
如果肽不溶于纯水，超声处理可能有助于分解任何颗粒并提高溶解速度。
注意：超声处理会导致溶液升温和肽降解。  

对于高碱性肽 

如果肽含有许多碱性氨基酸（K、R 等），请使用乙酸水溶液（1 至 10%），并进行或不进行超声处理。对于疏水性很强的肽，请使用 50% 乙酸水溶液。 


对于高酸性肽  

如果肽含有许多酸性氨基酸（E、D 等），请使用氨水溶液（1 至 10%）或挥发性碱性缓冲液（pH 高达 8），例如 N-乙基吗啉乙酸盐或碳酸氢盐，并进行或不进行超声处理。色谱分析前可能需要调整 pH 值。 
丙醇或乙腈可用于溶解一些中等大小的肽。如果要将肽注射到柱上，有机溶剂尤其是丙醇的用量必须保持少量，否则保留时间将受到很大影响。  
 

对于高疏水性肽  

如果肽具有高度疏水性，具有芳香族或烃类侧链，例如 Val、Leu、Ile、Met、Phe、Try、Ala，或者如果肽是中性，则使用离液剂，例如 DMF/D”>
a。高浓度离液盐可通过破坏二级结构来帮助溶解肽。 
b.离液剂适合制备用于分析的溶液，但可能会干扰用于肽研究的生物系统 
C。滴加 DMF 或 DMSO（最多 30%）直至肽溶解。 
d.在反相色谱中，DMF 将与缓冲液前沿一起洗脱。峰值可能会很高，具体取决于注射量。大多数肽的保留时间比大的 DMF 峰洗脱所需的几分钟要长。如果肽非常小并且洗脱较早，则注射肽时可能必须降低起始百分比。  

冻干肽的储存  

所有肽均应冷藏保存，最好在 -20 ℃ 下保存，以获得最大稳定性。大多数肽在 -20 ℃ 以下储存时将保持稳定数月。这适用于许多氨基酸衍生物、脂质、酶和其他蛋白质以及肽。例外是固定化蛋白质和肽。 
使用冷藏产品时，应将瓶子或小瓶加热至室温。打开前放入装有新鲜干燥剂的干燥器中。从 -20 ℃ 起，这可能需要一个小时或更长时间，具体取决于包装尺寸。如果不这样做，打开瓶子或小瓶时可能会导致产品上形成冷凝，并会大大降低材料的稳定性。打开后，应称出所需数量以防止吸水。对于某些吸湿性肽来说，这是一个特殊的问题。  

溶液中肽的储存  

溶液中的肽比冻干肽稳定性差得多。为了获得最佳结果，请遵循以下准则。 
1. 避免反复解冻和冷冻。建议将储备溶液等分。只解冻需要的部分。请勿储存稀释溶液。
2.  为了获得最大的稳定性，请在 -20 ℃ 下储存在无菌、pH 5 至 7 的缓冲溶液中。
3.  半胱氨酸、蛋氨酸或色氨酸等氨基酸容易氧化，应溶解或保存在无氧水中。

4. 细菌污染会降解肽，因此请使用无菌水或缓冲液。