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WEST BLOT检测中高性能封闭产品的作用和选择

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蛋白质印迹(WB)是把电泳分离的蛋白质转移到固定基质上，然后利用抗原抗体反应来检测特异性的蛋白分子的技术，包括三个部分：SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳转移，免疫印迹分析。

固相载体表面（如ELISA板，NC膜或者PVDF膜上等）有很多孔，通过电转或包被，胶上的蛋白被转移到了膜上，或抗原/抗体固定在板上，蛋白以机械填补（堆积）和吸附的方式结合于表面。蛋白进入了表面的孔里面，但蛋白并不是连续的，有很多空隙，而且比如说样品孔之间也有空隙，这些孔并没有填进东西，而抗体也是蛋白，也会被吸附在空的孔里，这样，就会有很多非特异性的信号。封闭液中的蛋白可以与表面上的空白位置结合，同样以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“填补”和“覆盖”蛋白结合位点以避免一抗的非特异结合，所以有“封闭”的说法。同样这两种作用使封闭液中的蛋白能够很牢固的结合在空白位置上。这样，抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。封闭剂应封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白、不结合靶蛋白表位、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。封闭常用试剂有：BSA, 血清, 脱脂奶粉, 酪蛋白和无蛋白化合物。

KPL是全球较大的底物系统生产商，提供EILSA，WB，IHC等检测所需要的各种不同等级的显色底物与试剂盒，同时KPL也提供各种高性能封闭产品：

品牌   货号     品名                                规格

KPL  50-58-00 SignaLOCK Blocking Solution         125 mL

KPL  71-83-00 5X Detector Block                    240 mL

KPL  50-61-00 10% BSA Diluent/Blocking Solution    200 mL

KPL  50-82-01 Milk Diluent/Blocking Concentrate Kit 200 mL

1. SignaLOCK Blocking Solution是KPL最新推出的特等封闭液，试剂无蛋白，无动物源成份，使用该产品封闭无背景，信噪比超高，并且使用非常稳定，适用于WB实验的封闭，同时也可用于抗体或者蛋白的稀释液。

2. Detector Block（71-83-00）既可以作为封闭试剂也可以在膜检测化验中用作共轭稀释剂，作为封闭试剂，它可以阻止膜优先于共轭酶结合从而阻止了非特异性背景的发生。Detector Block专门为此制定了在膜的较高敏感背景下与非特异性位点最小的交叉反应。作为共轭蛋白质和抗体的稀释剂，它较大限度地减少本身和膜，及其他蛋白质的非特异性结合的共轭。除了适用于WB实验以外，还适用于ELISA，Southern，Northern等实验。

其主要成分是：5X Detector Block Solution is supplied as a concentrated liquid，使用详见说明书。

3. BSA是最常用的封闭剂，成分单一适用于大多数情况。

KPL的产品10% BSA Diluent/Blocking（50-61-00）具有双重的作用。作为封闭试剂，它可以在主要抗原或抗体结合到固相表面上以后，与任何剩余蛋白结合位点结合。作为抗原，抗体和其他蛋白质的稀释剂，它可以确保与这些反应物之间的以及与固相表面的之间的最小非特异性反应。其主要成分是：10% BSA Diluent/Blocking Solution contains 10% Bovine Serum Albumin (BSA) in a phosphate buffer

使用比例：

Blotting Blocking 1:10

(i.e. 1 mL 10% BSA Diluent/Blocking Solution + 9 mL water)

Diluent1:10

(i.e. 1 mL 10% BSA Diluent/Blocking Solution + 9 mL water)

4. Milk Diluent/Blocking Concentrate Kit（50-82-01）也是具有和以上试剂双重的作用，其主要成分是： Milk Diluent/Blocking Solution Concentrate contains 2% non-fat dry milk in a borate buffer.

使用比例：

Blotting Blocking 1:10

(i.e. 1 mL Milk Diluent/Block + 9 mL water)

Diluent 1:20

(i.e. 1 mL Milk Diluent/Block +19 mL water)

KPL公司是美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司，同时也是世界上较大的二抗和底物显色系统的生产商。其可以提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂，其产品有：亲和纯化的抗体和偶联物、ELISA和杂交底物、蛋白检测和纯化试剂盒、核酸标记和检测试剂以及其它辅助试剂等。

KPL为我们的客户提供他们所需的最优品质的产品.上海金畔生物科技有限公司将一如既往的为您提供最优质的植物学相关产品和高品质的产品技术服务。我们能为您提供一站式的产品及实验解决方案。如果您对我们的产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询植物学相关的实验解决方案，或者问询您所感兴趣的产品类型。